一氧化氮合酶对脑损伤后神经细胞凋亡的影响.pdfVIP

——————————————————————————————————一 挫捌盔生2壁竖塔盘腿虫遗熊±堂焦i金：塞： 氢焦氢金堕型照趱伍丘ii鳖瓠盥型立盥毖蛔 nitricoxide 可分为二种亚型：结构型Nos(constructive cNOs)和诱生型N0s synthase， (induciblen㈣coxide Nos，nNOS) 和内皮型Nos(endothelialNOs，eNOS)陋1”。研究表明，不同皿型的NOS在脑损伤 保护作用。脑损伤后nNos和iNos产生的No往往会导致神经细胞的坏死。在脑损伤 早期．神经细胞的坏死主要是由nNos所引起㈣1”，而在脑损伤晚期，神经细胞的坏死 牛要是由．NOs导致∞2”。此外，NO与凋亡也有着密切的关系，人体许多组织的凋亡 都与No有着密切的关系，但是在人体的不同组织中，No对凋亡的影响也不同。在软 骨细胞、肌母细胞及胰岛细胞中，NO的作用是诱发凋亡，而在B淋巴细胞、嗜酸性粒 细胞中，NO的作用是抑制凋亡[22】。有研究表明，脑损伤后神经细胞的凋亡有N0的参 与阻2”， iNOs在凋亡中所起的作用却并不确定，有人认为iNos可以促进脑损伤后神 经细胞的凋亡【2”，这一过程与cyt．c有着密切的关系阮2”，也有学者认为iN0s产牛的 NO可以抑制神经细胞的凋亡[28】。而nNos对脑损伤后神经细胞凋亡的影响尚末见报道。 不明了。 本次实验采用大鼠重型弥漫性颅脑创伤模型，分别运用nNOs的抑制剂．7一NI 原位末端标记TUNEL法和免疫组织化学法观察了大鼠脑损伤后海马cAl区的神经细胞 的影响及其相关机制。 材料与方法 1实验材料与仪器 1．1主要试剂： 公司。 1．2实验动物： 健康雄性SD大鼠(购自郑州大学医学院实验动物中心)，体重3009．3509，自然光照， 环境安静，温度适中，自由进食、水。 签倒轰堂2塑照邕在弱皇遣醵垂整焦监童 氯：氇氢盘壤盥鲢热笾重翌璧缀照翅耋睦鼗魏 1．3主要仪器设备： 震荡仪(江苏)。 2实验方法 2．1实验动物分组 330只大飘随机分成六组：正常对照组(10只)、假手术组(80只)、脑怠口伤组(80 2．2实验动物的处理 2．2。l大鼠重烈弥漫性颅脑创伤模型制各 按照Mannarou}”1方法制备重型弥漫往颅脑创伤模型，方法如下： l、制备前O+5小时经腹腔注射陋托品(O．1m啦g)后，以戊巴比妥锻(35m非g) 腹腔注射麻醉动物至疼痛刺激反应消失。 2、将麻醉霜大鼠腹＆}位固定于海绵床垫，以75％洒精消毒术区衙．沿中线矢状切 开头皮约15mm并剥离骨膜，履露冠状缝及人字缝，将一不锈钢垫固定在大鼠冠状缝与 人字缝之间。 3、将大鼠头部固定于致伤架下，重4509、直径18mm的铜棒沿垂：区玻璃管l。5m 高度自由落下致伤后，迅速移开大鼠以免铜棒反弹造成头部二次击伤。 4、制备完毕赢，大鼠头皮伤口常规消毒、缝合。 5、假手术组仅给予麻醉及头皮切开、缝合，但不致伤，正常对照组不敛任何处理。 2．2．2动物给药方法 直至各时相点处死。脑创伤组、假手术组及正常对照组在相同时间内绘予等量生理盐水 腹腔注射。 2．3标本采集与制各 将大鼠动物进行乙醚吸入深度麻醉，仰卧固定于木板上开胸，4℃4％多聚甲醛的 O．Imolm磷酸缓冲液经心灌流固定30分钟后，断头取出脑组织，置于4℃4％多聚甲醛 的O．1mol／L磷酸缓冲液中固定12—24小时。将固定后的脑组织进行常规脱水、二甲苯透 明后制石蜡包埋，冠状连续切片，置于60℃烤箱烘烤l小时后，按下述方法迸行染色。 。—————————————————————————一 差刚_超生2鲤§疆在墼生渣受主生盈逾窑 氢毡担盒睦煎脑掘翅面授经麴盟通圭赶越 2．4HE染色方法 i、选取脑组织石蜡切片，经二甲苯及loo％，9s％，80％，70％浓度酒精梯度税蜡至水， 用蒸馏水冲去残存洒精。 2、明矾苏木素染色15min，自来水漂洗3mi