六味地黄汤对大鼠单侧输尿管梗阻后肾小管间质TIMP-1和ColⅣ的影响.pdfVIP

第一部分材料与方法 1．实验材料 1．1药物 六味地黄汤(熟地黄249、山茱萸1 丹皮99)，均购自湖南中医药大学附一院药剂科。先将药材用相当于药材5 水煎煮，得二煎液。两煎液混合，于水浴恒温器上浓缩至浓度为每毫升药液 含生药：19。 9 02137) 依那普利(上海现代浦东药厂有限公司，批号：H31 1．2主要试剂 大鼠’肾组织IV型胶原蛋白试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司 BA02174 BA0575 大鼠肾组织TIMP-1试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司 即用型SABC免疫组化染色试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司 SAl022 剂、梯度乙醇、二甲苯、苏木素一伊红染液均由湖南中医药大学组胚教研室 提供。 1．3主要仪器 DD一5低速离心机 湘仪离心机仪器有限公司 0 双目20型显微镜 江南光学仪器厂 01 德国 来卡020-5070型光学显微镜 JVCTK—C1 日太 38lEG型彩色光学摄像仪 El立7170A全自动多功能生化分析仪 日本 D181 O自动双重纯水蒸馏器 上海申生科技有限公司 TG3288光学读数天平 湘仪天平仪器厂 0PTON多功能显微镜 西德 LHBll80组织修整机 瑞典 1．4实验动物 健康Sprapue—Demey雄性大鼠72只，体重250±20g，由湖南中医药大学 实验动物中心提供。每笼4X，大鼠饲养环境保持通风、恒温、安静，定期 更换垫料，消毒笼具。给予12h灯光照射管制。每只大鼠均给予严格的卡片 登记管理。 2．实验方法 2．1实验分组 假手术组 (18X)模型组 (187,) 依那普利组(187,)六味地黄汤组 (18只) 实验分批进行，将72只SD大鼠按完全随机方法分为4组、组内再随机分 成术后3天、7天、14天共3个时间点，每个时间点6只大鼠，术前禁食，六味 地黄汤组(人的剂量×0．01 8×5／Kg体重计算)。假手术组(等体积生理盐水 灌胃)，直到处死为止。模型组(等体积生理盐水灌胃)，依那普利纽(1kg。 0mg dl瘩于等体积生理盐水灌胃J，各组每天灌胃一次。 2．2造模方法 、 造模方法根据文献报道”3的方法进行10％水合氯醛麻醉大鼠(0．35mi／ t 009引-算)，然后将大鼠俯卧位固定于大鼠固定板上(见图1)，定位于左侧 处，向尾部方向切开皮肤，约1—2cm，铺无菌纱布，钝性分离皮下组织及肌 层，暴露左侧肾脏(见图3)，沿肾蒂向肾下极方向寻找左输尿管，分离左输 管(见图6)，使左肾完全梗阻。逐层缝合。假手术组大鼠打开腹腔后分离左 侧输尿管，但不结扎和离断左侧输尿管。伤口局部每日用络合碘消毒。 3．观察指标及方法 3．1大鼠行为和体态变化 记录大鼠饮食、饮水活动、对刺激的反应、皮毛光泽、脱毛等情况。 3．2体重变化的观察 于术前、术后3、7、14天