低剂量ZEA对断奶仔猪血清代谢产物、肝肾组织病理学的影响.docVIP

　　低剂量ZEA对断奶仔猪血清代谢产物、肝肾组织病理学的影响 　　引言 　　【研究意义】玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEA），又称 F-2 毒素，主要由禾谷镰刀菌产生的一种非类固醇类的、具有雌激素活性的真菌毒素。全世界谷物和饲料普遍受到 ZEA 的严重污染。在中国，落后的谷物收获条件和油料加工过程加重 ZEA 的污染，使ZEA 等霉菌毒素的污染程度远远超出国外。【前人研究进展】研究表明，ZEA 及其代谢物通过雌激素受体激活雌激素反应基因的转录，引起多种动物的雌激素中毒症。ZEA 主要在肝脏进行代谢，因此肝脏是 ZEA 的靶器官之一，影响鼠、雌性仔猪和兔肝脏正常功能酶的活性，诱发不利的肝脏损伤，以致发展成肝癌。【本研究切入点】国内外有关 ZEA的大量文献主要集中在对成年繁殖母猪繁殖性能和雌性断奶仔猪外生殖器官上的影响，对肝肾功能的研究仅限于血液指标和高剂量ZEA处理的实验动物。迄今为止，尚未见有关低剂量 ZEA（1.03.2 mgkg-1）对断奶仔猪肝肾组织病理学及毒性剂量效应关系的系统报道。【拟解决的关键问题】本研究以肝肾为研究对象，研究低剂量 ZEA 对断奶仔猪血清代谢产物、肝肾组织病理学和肝脏超微结构的影响，以期揭示 ZEA 对肝肾毒性及其作用机制，为养猪生产提供理论指导。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验时间和地点 　　试验时间为 2009 年 9 月 21 日至 2010 年 6 月 10日，试验在山东省沂南县孙祖镇金珠园猪场进行。 　　1.2 试验材料 　　玉米赤霉烯酮为以色列 Fermentek （Jerusalem,Israel）公司生产，色谱纯，纯度保证值为 98%。 　　1.3 试验动物与管理 　　仔猪 21 日龄断奶，选择（35plusmn;1）日龄、平均体重为（10.36plusmn;1.21）kg 健康的三元（斯格长大）杂交断奶仔猪 20 头，按照体重随机分为 4 个处理，每个处理 5 头，每个重复 1 头猪，各处理组间初始体重差异不显着（P＞0.05）。 　　仔猪采用试验笼（0.48 m2）单独饲养。单体笼使用塑料漏缝地板，安装有乳头饮水器和料槽，仔猪自由采食和饮水。试验开始前对猪舍进行全面清扫、消毒，试验期间每周进行一次猪舍消毒。舍内安装红外保温灯，第 1 周维持试验笼内温度在 30℃左右，第 2周将猪舍内环境温度维持在 2628℃。猪舍相对湿度为 65%。预饲期 7 d，正式期 18 d。试验在沂南金珠园猪场进行。 　　1.4 基础日粮与试验设计 　　试验基础日粮组成和营养水平见表 1。对照组（Contr.）饲喂基础日粮，试验 1 组（Contr. + ZEA1）、2 组（Contr. + ZEA2）和 3 组（Contr. + ZEA3）分别在基础日粮的基础上添加 1.1、2.0 和 3.2 mgkg-1ZEA。 　　1.5 试验日粮的配制、养分含量和毒素水平的测定 　　1.5.1 玉米赤霉烯酮污染日粮的配制 将色谱纯度（98%）晶体粉末状 ZEA 由乙酸乙酯溶解制成溶液，再将含有 ZEA 的乙酸乙酯溶液喷洒到一定量的滑石粉载体上，并放置过夜使乙酸乙酯挥发，制成1 000 mgkg-1的 ZEA 预混剂，然后用不含毒素的玉米粉进一步将 1 000 mgkg-1的 ZEA 预混剂稀释成10 mgkg-1的ZEA预混剂，最后按照试验日粮中ZEA的设计水平，用 ZEA 预混剂替代配方中的玉米和载体配制成试验日粮。试验所需日粮需于试验正式开始前一周一次性配合完成，在实验前和试验结束后分别取样，用以分析日粮中的养分含量以及毒素水平。 　　1.5.2 常规养分测定 日粮常规养分含量按照文献的方法进行。粗蛋白用凯氏定氮法；能量用 HR-15氧弹式热量计测定；钙根据高锰酸钾滴定法测定；食盐按照硫氰酸铵反滴定法测定；氨基酸用日立 835-50氮基酸自动分析仪进行测定。 　　1.5.3 日粮毒素测定 日粮中 ZEA、呕吐毒素、黄曲霉毒素和烟曲霉毒素测定委托台湾亚洲谷物检测中心 （ Asia Mycotoxin Analysis Center, ChaoyangUniversity of Technology）测定。呕吐毒素的测定采用高效液相色谱法（HPLC），ZEA、黄曲霉毒素和烟曲霉毒素采用酶联免疫吸附（ELISA）和荧光测定法。黄曲霉毒素、ZEA、呕吐毒素和烟曲霉毒素的最低检测限为分别为 1 mu;gkg-1、0.1、0.1 和0.25 mgkg-1。对照日粮和试验日粮中 ZEA 的含量分别为 0、1.1、2.0 和 3.2 mgkg-1，未检测到其他毒素。【表1】 　　 　　1.6 血样的采集、处理与测定 　　试验结束后，对仔猪进行前腔静脉空腹采血。使用真空促凝管采集血样 30 mL，3 00