玫烟色拟青霉不同分离株的生物学特性探究_0.doc

玫烟色拟青霉不同分离株的生物学特性研究 1、相关定义 1.1、乳酸菌的定义、分类和著名菌种 acticac记bacteria,简称LAB)不是微生物分类学上的名词,而是 指一群可发酵碳水化合物、发酵产生大量乳酸的革兰氏阳性球菌或杆菌的统称 (zaunmulle:et al.,2006)。它们具有一些基本特征: (l)细胞为革兰氏阳性; (2)细胞形态为杆菌或球菌; (3)过氧化氢酶为.阴性; (4)消耗葡萄糖50%以上产生乳酸; (5)不形成内生饱子; (6)无运动性,或极少运动。 双歧杆菌在过去是归于乳酸菌之中,现在则不属于乳酸菌而是单独另辟双歧 杆菌属(B沪dobacterium),其中的一个原因是所产生的乳酸不足50%。 (二)乳酸菌的分类 目前尚未有统一的定论,依据(({白杰氏系统细菌学手册》第9版第2卷(1986), 乳酸菌主要归于以下6个属(表l一1)。 表]一1乳酸菌分类 Tab.l一1 LAB elassification 属名种数生存环境 链球菌属(及声甲tococcl,s)14动物肠管、乳制品和植物 片球菌凤尸亡J动coccus)8酱油、腌制物、腐败啤酒等发酵物 明串珠菌属(L eucoasoc)4蔬菜、水果、乳制品和葡萄酒 乳及乳制品、酿造食品、腐败肉类、动物肠管 乳杆菌属(Laetobaeilh砚s)44 用!口腔 双歧杆菌属(B沪dobaclerium)24 产抱乳杆菌属(助口roluc矛obacilll,s)] 动物肠管、口腔和牛羊瘤胃 鸡饲料 浙江工商人学硕士学位论文 1.2、志贺菌毒力测定的概念 志贺菌与其它致病菌一样,表示毒力大小的单位主要有以下几种。 1.4.1 最小致死量(minimal lethal dose,MLD) 指在一定时间内使特定动物感染后全部发生死亡的最小活志贺菌的量或毒素量。这种测 定毒力的方法比较简单,但有时因动物个体差异而产生不确切的结果。 1.4.2 半数致死量(median lethal dose,LD50) 指在一定时间内使半数实验动物感染后发生死亡的活志贺菌量。测定LD50应选取品种, 年龄、体重甚至性别等方面都相同的易感动物,分成若干组,每组数量相同,以递减剂量的 活志贺菌分别接种各组动物,在一定时限内观察记录结果,最后以生物统计方法计算出 LD50。由于半数致死量采取生物统计方法对数据进行处理,因而避免了动物个体差异造成 的误差,所以它较MLD更能反映毒力的真实情况,但此法需要动物较多,费用较昂贵。LD50 的数值越小, 表示微生物或毒物的毒性越强;反之,LD50数值越大, 微生物或毒物的毒性越 低。 1.4.3 半数感染量 (ID50 ) 某些病原微生物只能感染实验动物、鸡胚或细胞,但不引起动物死亡,可用ID50来表 示其毒力。ID50是指能使半数实验动物或细胞发生感染的活微生物量,测定的方法与LD50 类似,只是在统计结果时易感染者代替死亡者。 1.4.4 测定LD50的方法 LD50的计算方法有10多种,目前用于计算LD50的方法常用的方法有累计法又称 Reed-Muench法[68,69 ],是用呈等比级数排列的剂量进行实验,要求每组动物数相等。另一种 常用方法为改良寇氏法,其计算LD50和可信限计算结果精确,能求出标准误,只是应用时 必须满足3个条件: 反应量大致呈正态分布,剂量必须按等比级数分布,各组动物数相等。 虽然有条件限制, 但还是有很多研究者为能运用该法计算而合理地设计实验。80年代出现的 “Bliss法半数效量电子计算器程序运算法”。曾得到广泛应用,但随着时代的发展。尤其是 电子计算机的日益普及,该方法也显示出操作比较繁杂、无法人机对话及无结果输出等不足。 现在也能直接用SPSS软件进行几率单位加权回归法(Bliss)计算LD50的方法,其具有简单, 直接,直观和方便的特点。 12 1.5.1 传统检测方法 用于检测志贺菌的传统方法是将食物样品分步增菌,以增加病原菌的检出率。将无菌采 取的典型病料分别接种于营养肉汤、麦康凯琼脂平板、SS琼脂平板和1%葡萄糖肉汤中,于 37培养24h。细菌在营养琼脂培养基上生长,但生长不良,呈圆形、微凸、光滑湿润、无 色、半透明、边缘整齐,直径≤1mm的小菌落;在麦康凯和SS琼脂平板上生长良好,形成无 色透明、表面光滑、圆形、微凸、边缘整齐、直径1~2mm的小菌落。1%葡萄糖肉汤24h培 养物,无菌膜和菌环,轻度混浊,试管底部有粘稠絮状沉淀。具有这些培养特性的细菌疑为 志贺菌,要进行菌落抹片、革兰氏染色、镜检。显微镜下细菌呈两端钝圆,中等大小,散在 排列的革兰氏阴性杆菌。符合上述特征的细菌可初步定为志贺菌。 1.5.2 免疫学检测方法 免疫法有较高灵敏度,样品经增菌后可在较短的时间内检出,抗原和抗体的