反义AcInv基因转化马铃薯方法的研究.PDFVIP

维普资讯 { l j 2002年 6月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 37卷 、 ， 第2期 l27～I38 JOURNALOFGANSUAGRICULTURALUNIVERSITY 季 刊 反义AcInv基因转化马铃薯 方法的研究 张建全 ，张金文2 (1．甘肃草原生态研究所 ．兰州 730020；2．甘肃农业大学农学院，兰州 730070) 摘要 ：马铃薯反义A~lnv基因．采用农杆菌介导法．选用生产上推广的9个普通四倍体栽培 种 ，对影响转化的各个 因素进行 了优化研究。结果表明：在愈伤组织诱导过程 中．卡那霉素 (Km)的适宜浓度为 100mg／L；生根过程中为50mgL／。外植体的预培养为：茎段 2d．叶盘 3 d效果较好；农杆菌浓度当 ODsao值为 0．5时对茎段和叶盘的转化效果均较佳；茎段和叶盘侵染 时间分别达 8min和 10min时转化率较高；外植体与农杆菌共培养时间分别为 2d和 3d时．茎 段和叶盘的转化率较高；各个品种的外植体在卡那霉素抗性培养基上均能形成愈伤组织．但只有 l号 (“大西洋”)最后从愈伤组织J分化成苗．形成正常植株 ，植株再生率为 l1．2％．PCR扩增 检测表明大部分转基因植株为阳性。 关键词：反义Aclnv基因；农杆菌介导；转化；马铃薯；PCR 中图分类号：S532 文献标识码：A 文章编号：l003．43l5(2002)02．0127．012 马铃薯 (SolanumtuberosumL．)是我省的优势作物，具有生育期短、适应性广 、抗灾 能力强 、增产潜力大等特点 ”【。目前已成为继小麦 、土米之后的第 3大作物。近年来随着 我国市场经济的快速发展 ，快餐业 、加Tl业应运而生 ，特别是中央西部大开发战略的实 施，马铃薯深加工业必将成为我省一项治贫致富的支柱产业。 马铃薯块茎收获后于低温条件下贮藏常常引起块茎还原性己糖的积累 (冷甜化)2【3．引。 块茎糖化不仅使淀粉和干物质含量减少，降低了出粉率，而且在高温油炸薯片 、薯条的过 程中，通过非酶促的迈拉尔德反应I，使细胞中还原糖与 自由氨基酸发生反应 ，生成人们 难以接受的褐色或黑色物质并带有苦味，严重影响食品的风味和观感。因而块茎低温糖化 问题对马铃薯加工业尤为重要。 块茎糖代谢生化研究证明尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (UGPase)和酸性转化酶对淀 粉降解起重要作用 【。对马铃薯块茎低温糖化的反义抑制研究最早见于 Zrenner等 ，【】所做的 反义 RNA抑制 UGPase表达活性的报道。研究结果显示．UGPase基因的表达调控多发生 在翻译水平 ．UGPase活性下降 95％～96％．但块茎的低温糖化并未得到有效抑制。 Spychalla等 引【，Sowokinos等 【】和 BorovkovI。】‘都得到相似的结果。对酸性转化酶 (Aclnv的 作者简介：张建全．(1974 )．男，甘肃武威人．农学硕十．毕业丁竹 农、№人学农学系．现在甘肃草原生态所_T作。 收稿F=I期：2~2-o3—27 维普资讯 128 II‘ 肃 农 业 人 学 学 报 2002年 研究报道很少，最早是由ZhouI“l等从低温诱导下的马铃薯块茎中克隆到了AclnvcDNA序 列；Zrenner等 【I等根据 Zhou的报道序列．克隆了Aclnv基因．并构建了植物表达载体 ． 研究了转反义基因植株的块茎抗低温糖化的效果．结果表明转基因马铃薯块茎的可溶性糖 含量未发生改变，但已糖 ／蔗糖比率下降，就是说蔗糖的降解反应受到抑制 ，使蔗糖积累而 还原糖含量减少，马铃薯油炸薯条 、薯块研究 【I指出，高温油炸褐变与蔗糖含量高低无直 接联系