食品科学与技术2010生化实验讲义.docVIP

实验一 脂肪的定量测定 ——索氏（Soxhlet）提取法 一、目的和要求 学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。 熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处理、定量转移、烘干、恒重等。 二、原 理 本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。 用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。 脂肪类化合物一般都溶于有机溶剂（如乙醚、石油醚）而不溶于水或微溶于水，利用此特性，可以用索氏脂肪提取器抽提出样品中的脂肪。 索氏脂肪提取器——索氏（Ｓｏｘｈｌｅｔ）脂肪提取器为一回馏装置,由浸提管、小烧瓶及冷凝管三者联接而成，浸提管两侧分别有虹吸管及通气管。盛有样品的滤纸包放在浸提管内，溶剂乙醚（或石油醚）盛于小烧瓶中，加热后，溶剂蒸汽经通气管至冷凝管，冷凝的溶剂滴入浸提管，浸提样品。浸提管内溶剂愈积愈多，当液面达到一定高度，溶剂及溶于溶剂中脂肪类物质经虹吸管流入小烧瓶。 小烧瓶的溶剂由于受热而汽化，气体至冷凝管而滴入浸提管内，如此反复提取回馏，将样品中脂肪类物质提尽并带到小烧瓶中。最后将小烧瓶中的溶剂蒸去，烘干，小烧瓶的增重 ，就是样品中所含脂肪的量。  因本法提取的物质，除中性脂肪外，还会有游离脂肪酸、蜡、磷脂、固醇及色素等脂溶性物质，故提出的物质只能称粗脂肪。? 三、步 骤 样品的准备 将样品在80度烘箱内烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管内。注意勿使纸包内样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管内，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中。 1.抽提 洗净提取瓶于105℃烘干至恒重，冷却后准确称重，并记录瓶重。装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。 2.加热提取 精密称取待测样品2g（A），用滤纸包好，放入浸提管内，纸包长度不能超过虹吸管高度。于已称重的小烧瓶内倒入1/2-1/3体积的石油醚（其量应略大于浸提管内体积），联接索取器各部分（不能涂凡士林）。置约70℃恒温水浴锅内（水必须是蒸馏水或置于电热板上）控制加热温度，使每小时回馏3－5次较宜，一般提取10小时左右。? 4.称重 提取完毕，待石油醚完全流入小烧瓶时取滤纸包，再回馏一次以洗涤浸提管。继续加热，待浸提管内石油醚面接近虹吸管上端而末流小烧瓶前，倒出浸提管中的石油醚，如果小烧瓶中尚留石油醚，则继续加热蒸发，直至小烧瓶中溶剂基本蒸完。停止加热，取下小烧瓶，用吹风机在通风橱中将瓶中残留石油醚吹尽。再置103－105℃烘箱中烘半小时，取出冷却后立即称重。?将提取瓶中的石油醚全部蒸干，洗净外壁，置于105℃烘箱中干燥至恒重，再把瓶中脂肪倒出，洗净，烘干，并恒重称重，然后按下式计算粗脂肪百分含量。 粗脂肪（100％）＝×100％ 也可以按照下式较简易的计算 粗脂肪（100％）＝纸包的重量－烘干纸包的重量×100％ 芝麻的重量 四、器材与试剂 1.器材：天平，索氏脂肪提取管，恒温水浴锅，滤纸。 2.试剂：石油醚（30－60℃）。 五、实验报告 计算所测材料中的粗脂肪含量,记录实验中发生虹细的时间,进行比较总结规律,并比较不同种类的样品的脂肪提取率,与通过从资料中查到的脂肪含量进行比较。从中进行总结。 六、思考题 哪些种子的粗脂肪含量较高？ 写出四、五种良好的脂肪溶剂. 查阅生化类教科书，写出几种脂溶性维生素。 实验二 蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法 目的要求 1、熟悉 721型分光光度计的原理及使用方法。 2、学习考马斯亮蓝 (Coomssie Brilliant B1ue)法测定蛋白质浓度的原理和方法。 二、721分光光度计的使用 分光分析原理 有色溶液对光线有选择性的吸收作用，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液，虽对可见光无吸收作用，但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。吸收光谱的测定可以用来鉴定各种不同的物质。 分光分析法常用于测定溶液中存在的光吸收物质的浓度，其理论依据是Lambert- Beer定律。 （一）Lambert定律 当一束单色光通过一均匀溶液时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱，若溶液的浓度(C)不变则液层的厚度(L)愈大，光线强度的减弱也愈显著。 若