家蚕丝素重链启动子克隆片段在家蚕体内和昆虫培养细胞内的渗漏表达.pdfVIP

维普资讯 2006；32(4) 蚕 业 科 学 CANYE KEXUE 491 家蚕丝素重链启动子克隆片段在家蚕体 内 和昆虫培养细胞 内的渗漏表达 汪生鹏 陆长德 (中国农业科学院蚕业研究所．镇江 212018； 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所，上海 200031) 摘 要 为了探讨家蚕丝素重链基因的调控机制。应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移 栽体 ，以绿色党光蛋白基 因为报告基因，研究了丝素重链基因启动子克隆片段在家蚕丝腺的不同部位。以及脂肪体 细胞和s 培养细胞中的表达渗漏。结果发现，丝素重链启动子克隆片段在家蚕中部丝腺存在表达渗漏。并且在中 部丝腺前部的表达活性要强于中部丝腺的中部和后部；克隆片段在脂肪体组织存在表达渗漏。通过荧光解剖显微 镜可以在体表观察到绿色荧光；克隆片段在s{9培养细胞中也存在表达渗漏。上述结果说明目前已知的有关家蚕 丝素重链基因的调控元件仍不充分，家蚕基因组 中可能还有其他调控丝素重链基因表达组织和时相的特异性元件 存在。 关键词 家蚕；丝素重链基因；渗漏表达；重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 中图分类号 $881．2；Q78 文献标识码 A 文章编号 0257—4799(2006)04一o491—40 LeaakReeddExpressionofClo0nnddee FibroinHeavyChainPromoterSequence inSilkworm ，Bombyxmori，and InsectCulturedCells WANGSheng-Peng’ LUChang-De ’ (SericulturalResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，ZhenjiangJiangsu212018，China； InstituteofBiochemistryandCellBiology，ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences，Chinese AcademyofSciences，Shanghai200031，China) Abstract Inordertoprobeintotheregulationmechanism offibroingeneinsilkworm，leakedexpressionof clonedfibroinheavychainpromotersegmentindifferentpartofBombyxmorisilkgland，fatbodyandSf9cul— turedcellswasstudiedbyusingrecombinantAcMNPVasgenetransfervectorandEGFPasreporter．There— suitsshowedthatexpressionleakinghappenedinmiddlesilkgland(MSG)ofsilkwormandtherelativeactivity ofFibHpromoterinanteriorMSG isstrongerthaninmiddleMSG andposteriorMSG ，thatexpressionleaking alsohappenedinsilkworm fatbody．thefluorescenceOfEGFPcanbeobservedthroughsilkworm cuticleun— derfluorescentmicroscopy。andthatFibHpromoterhasleakedexpressioninSf9culturedcellsaswel1．These resultsshowedthatcurren