细胞工程学习题及答案.docVIP

细胞工程学习题及答案将亲本愈伤组织或高密度的悬浮细胞同低密度细胞一起培养，以促进低密度细胞生长、分裂的培养方法。非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以了。深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。是一类特殊的触发因子，它能够开启代谢过程中酶的活性，因而能够增加次生代谢物的含量，有时甚至可以诱导出新的化合物。诱导子是来自生物的化合物。内生诱导子：来自植物细胞分子 两相培养技术是在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系形成上、下两相;细胞在水相中生长，合成的次生代谢物质分泌出来后转移至有机相中。） （2） 【无菌操作设备：净化工作台或生物安全柜、无菌接种箱 灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、鼓风干燥箱、过滤灭菌装置 细胞培养设备： CO2培养箱、生物反应器 细胞学设备：倒置显微镜（基本）、显微操作系统、流式细胞仪 基本设备：纯水设备、离心机、液氮罐等】 4、简述玻璃器皿的清洗过程。 玻璃器皿的洗涤： 步骤：（）（或%稀盐酸浸泡过夜）（））（）（清洗液）（）-蒸馏水）1）灭菌器内物品的放置总量不应超过灭菌器柜室容积的85%。各包之间留有空隙，以便于蒸汽流通； （2）灭菌锅密闭前，应将冷空气充分排空； （3）灭菌完毕后减压不要过猛，压力表回归“0”位后才可打开盖或门。 6、影响紫外线杀菌效果的因素有哪些？ ·一般用于灭菌的紫外线波长是200-300nm，灭菌力最强的是波长为254nm的紫外线。 ·穿透作用微弱，所以紫外线常用作空气灭菌和表面灭菌。 ·紫外线进行直线传播，其强度与距离平方成比例地减弱。 ·湿度过大可降低灭菌效果，相对湿度以45％-60％比较适宜。温度宜于10-55℃范围。 ·紫外线灯管必须保证无尘油垢，否则辐射强度将大力为降低。 ·紫外线灯有一定的有效使用时间，一般为3000小时。 ·紫外线的杀菌效率，还取决于微生物的敏感性。一般杀死繁殖型微生物约3-5分钟，芽孢约10分钟。紫外线对酵母、尤其霉菌杀菌力较弱。 7、化学消毒剂的杀菌机制？影响消毒剂消毒灭菌效果的因素？ ·化学消毒剂的杀菌机制： （1）使菌体蛋白变性或凝固； （2）干扰微生物的酶系统和代谢； （3）损伤细胞膜，改变细胞膜壁的通透性。 ·影响消毒剂消毒灭菌效果的因素： （1）消毒剂的性质、浓度和作用时间； （2）细菌的种类与数量； （3）环境因素（有机物如血清等存在，会结合消毒剂，减低杀菌效果）。 8、无菌操作室如何消毒？ ·地面每天都要用0.1%的新洁尔灭或2%-5%的来苏尔拖洗（拖布专用） ·空气每天紫外灯照射消毒30-50min，并定期应用环氧乙烷、甲醛、丙二醇或乳酸等对空气进行较彻底的灭菌。 ·操净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30min（培养细胞和培养用液切勿受到紫外线照射）。在关闭灭菌灯后应启动送风机使之运转数分钟后再进行细胞操作。 9、简述动物细胞培养的一般过程。 取材、分离细胞：【用平衡盐溶液将取出的组织块清洗三次，将组织反复剪碎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗至组织块发白为止。静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。】 ( 原代培养：【（1）组织块直接培养法（2）酶解消化法】 ( 传代培养：【方法：（1）悬浮生长的细胞：直接分瓶（离心收集胞体、新鲜培养基稀释、转移新培养瓶）（2）贴壁生长的细胞：需经酶消化后才能分瓶】 ( 冻存、复苏：【冻存：· 冷冻过程要缓慢· 冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90％，无微生物污染。· 细胞浓度控制在：5x106－2x107/ml。快速解冻：冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1 分钟内全部融化】 10、为什么血清是动物细胞培养基中最有效和最常用的组分？ 血清对维持体外细胞生长具有极为重要的作用： （1） 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物等； （2） 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等； （3） 提供结合蛋白（载体蛋白）：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用； （4）提供促接触和伸展因子：如纤粘连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）,促使细胞贴壁； （5）可中和毒性物质保护细胞：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用；