仪器分析技术四2011.ppt

第三章 常用仪器分析技术（四） 第二节 色谱分析法(chromatography) 第二节 色谱分析法(chromatography) 第二节 色谱分析法(chromatography) 溶剂极性由小到大的顺序： 石油醚环己烷甲苯苯氯仿乙醚醋酸乙酯正丁醇正丙醇丙酮异丙醇乙醇醋酸甲醇甲酸水 展开剂的选择： 三角形法 第三节 有机质谱及两谱联用技术 按各离子 m/z的顺序及相对强度大小记录的图谱称为质谱图。 目前质谱法主要是与其他技术联用进行药毒物性质、结构的分析。 利用质谱图中离子峰的位置进行定性和结构分析，利用离子峰强度进行定量分析。质谱图用条（棒）（bar graph）图表示。 坐标 正离子的m/z为横坐标 相对离子强度（丰度）为纵坐标 基峰(base peak) 质谱中的最强（高）峰， 以其相对离子强度为100％, 其它离子峰以基峰的相对百分数表示 吗啡的质谱图 主要部件和工作流程 1储样器 2进样系统 3漏孔 4离子源 5加速电极 6磁场 7离子检测器 8接真空系统 9前置放大器 10放大器 11记录器 高真空系统 质量分析器 若B和 U固定不变， 则离子的运动半径R仅取决于 离子的m/z 离子检测器与放大器、记录器 作用： 接收并放大微弱的离子流信号 送至显示单元和计算机处理系统 样品的质谱图和数据 分子离子峰 碎片离子峰 同位素离子峰 分子离子峰 概念 分子电离一个电子形成的离子所产生的峰。 用途 确定化合物的相对分子质量 推断分子式 峰位（m/z值） 等于化合物的相对分子质量 一般出现在质谱图的最右端，但也有例外 相对强度 取决于分子离子的化学 稳定性 样品不纯或仪器有污染时，杂质峰可能出现在最高质荷比处。 样品分子的稳定性差时，分子离子峰很弱，甚至不出现，此时最高质荷比处的离子是碎片离子峰。 当出现M+n (n=1、2…) 同位素峰时，同位素可能出现在最高质荷比处。 四、质谱法的解析过程 确认分子离子峰，确定被分析化合物的相对分子质量。 确定分子式。 通过碎片离子峰分析官能团的类型。 通过与标准化合物质谱图比较确认该化合物。 吗啡的质谱图 例：以碎片离子分析官能团结构 第三节 有机质谱及两谱联用技术 碎片离子峰 概念 当离子源提供的能量超过分子的电离能时，分子离子原子间的化学键断裂，生成各种质量数低于分子离子的碎片离子，由此产生的质谱峰称为碎片离子峰。 用途 分子的碎裂过程与结构有密切关系，故该种峰能提供被分析化合物更多的结构信息。 峰位（m/z值） 位于分子离子峰的左侧。 正己烷 正癸烷 同位素离子峰（M +1峰,准分子离子峰） 概念 由于同位素的存在，可以看到比分子离子峰大一个质量单位的峰M +1 ；有时还可以观察到M+2，M+3… 峰位（m/z值） 例：CH4 M=16 12C+1H×4=16 M 13C+1H×4=17 M+1 12C+2H+1H×3=17 M+1 13C+2H+1H×3=18 M+2 同位素峰 分子离子峰 4. 定性依据 （1）利用组分斑点在展开后的薄层板中的位置和颜色鉴别 比移值Rf（retardation factor）： 薄层色谱法的基本定性参数 Rf：0-1之间 Rf=0,1的含义？ 在实际操作中，Rf在0.2-0.7之间为宜。 （2）利用原位光密度扫描图鉴别 ① 用薄层光密度扫描仪将光束照射在斑点上，改变波长依次扫描，可得斑点中吸光物质的反射吸收曲线。 ② 比对被测物质与相应标准品的反射吸收曲线。 （3）洗脱后鉴别 ① 针对展开后难以判断的组分斑点。 ② 先将其从吸附剂上洗脱下来，再用其他分析手段鉴别，如UV、GC/MS、HPLC/MS等。 5. 定量依据： （1）薄层扫描法——标准曲线法 （2）洗脱后定量法——先洗脱再用其他定量方法 （1）薄层板制备 二、薄层色谱的操作技术 用吸附剂和粘合剂（羧甲基纤维素钠CMC）制板： ⑴ 用0.1％-0.5％CMC溶液将吸附剂调成糊状，以适当的厚度（0.2～0.5mm）均匀涂于平板（玻璃）上，室温下自然晾干； ⑵ 使用前活化。 1. 定性分析 用点样器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于3mm。可并排点多个试样同时展开。 （2）点样 手工点样要求：点样不能空心，多次点样、干后再点，不要损伤薄层板面。 （3）展开 上行法是最常用的展开方式。 ①将薄层板倾斜放入盛有展