试验十离体心脏灌流.doc

绪　　言 神经生理学实验顺序：第一次 实验一；第二次 实验五；第三次 2,3,4；四 8,9；五 10；六 15；七 18 19 20；八 14；九 13；十 16,17；十一，12 　　生理学是一门实验学科，其研究的基本方法即是实验。生理学实验课的基本目的在于：⑴通过实验培养学生具有科学的思维方法和科学的工作态度；⑵在实验过程中使学生初步掌握生理学实验的基本操作技术；⑶了解获得生理学知识的科学方法；⑷验证和巩固生理学的基本理论。 　　二、生理学实验的特点及基本方法 　　生理学实验的特点在于主要以活的动物为实验材料，因此要求做到：⑴爱护动物，尽量减少动物在实验中的痛苦，并充分利用每只动物以获得尽可能多的观察结果和实验数据；⑵严格按实验步骤和要求进行操作，以免造成不必要的创伤和出血使动物的正常生理状态遭到破坏，从而影响到实验结果的可靠性。 　　生理学的基本实验方法分为急性实验方法和慢性实验方法两大类。 　　㈠急性实验方法　实验过程不能持久，实验后动物不能存活，实验观察能在短时间内完成的实验方法。一般又可分为两种： 　　⒈离体器官实验方法　把要研究的器官或组织从活的或刚死去的动物身上取下来，放在一个适宜于正常生理活动的人工环境中以观察和研究其生理功能。 　　⒉活体（在体）实验方法　在动物麻醉或大脑毁损的状态下，解剖暴露动物的某一器官组织以进行实验研究。 　　㈡慢性实验方法　是在某一特定条件下，连续地反复观察和记录清醒动物的生理机能，需要较长时间才有结果的实验方法。有时要先做无菌的外科手术，待动物恢复健康后再进行实验研究。此法在基础实验课教学中较少应用，主要广泛应用于研究工作中。 　　三、生理学实验课要求 　　⒈认真预习本次实验的原理、目的、要求、实验步骤和操作程序。 　　⒉严格按照实验步骤认真操作、仔细观察，在需要互相合作的实验中应互相配合。在整个实验过程中不得进行与实验无关的活动。 　　⒊注意保护实验动物和标本，尽量节省实验器材和药品。 　　⒋实验后将仪器整理整齐，所用器械清洗干净并擦干，做好本组卫生。 　　⒌遵守实验器械管理规定，爱护实验器械。 　　⒍及时整理实验记录，认真撰写实验报告，按时将报告交负责老师评阅。 　　四、实验报告写作要求 　　⒈写明姓名、日期、学号、组别及同组人员 　　⒉实验号和实验题目 　　⒊实验目的 　　⒋实验原理：可作扼要描述 　　⒌实验对象 　　⒍实验器材和药品 　　⒎实验方法和步骤：可作扼要描述 　　⒏实验结果：详细记录所观察的实验结果，以及获得这些结果所需的各种实验条件，并进行适当的分析和处理。 　　⒐实验讨论和结论：运用所学的理论知识对实验结果进行解释和分析，并指出其生理意义。也可对实验方法进行讨论和分析。 　 　 实验一　　蛙或蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本的制备 　　实验原理　两栖类动物的一些基本生理活动规律与哺乳类动物类似，其离体器官可以在室温下的任氏液中于一定时间内保持其生理机能，所以常用作生理学研究中的实验材料。坐骨神经─腓肠肌标本就是从两栖类动物后肢分离坐骨神经及其支配的腓肠肌所制成，常用于研究神经冲动的传导和神经肌肉接头的传递特性，以及肌肉的收缩机能，是研究神经、肌肉生理的最基本的实验材料之一。 　　实验目的　熟练掌握坐骨神经─腓肠肌标本的制备方法，为今后的神经肌肉实验打下有利的基础。 　　实验对象　蛙或蟾蜍 　　实验器材和药品　蛙类手术器械（蛙板、玻璃板、大头针、探针、普通剪刀、单面刀片、玻璃针、镊子、手术剪、滴管、线、烧杯、培养皿、锌铜弓、棉花）；任氏液。 　　实验步骤和观察项目 　　一、破坏蟾蜍的脑和脊髓　取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指和中指夹住其前肢，无名指和小指夹住其后肢，拇指按压其头部前端。右手持探针从相当于枕骨大孔处垂直刺入，然后向前通过枕骨大孔刺入颅腔，左右充分搅动捣毁脑组织。再将探针抽回至进针处，向后刺入脊椎管，反复抽插捣毁脊髓。此时如果蟾蜍四肢松软、呼吸停止、角膜反射消失，表明脑和脊髓已完全被破坏，否则应重复上述步骤直至蟾蜍出现如此现象为止。 　　二、左手捏住蟾蜍的腰部，右手持普通剪刀在其肩关节稍下方处剪断脊柱，然后提起脊柱，沿两侧剪开皮肤，蟾蜍头部与内脏自然下垂，剪去头部及所有内脏（注意切勿损伤沿脊柱两侧下行的坐骨神经）。 　　三、左手捏紧脊柱残端（注意不要碰到坐骨神经），右手捏紧其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢的皮肤，然后把标本放入盛有任氏液的培养皿中。将手及全部用过的手术器械冲洗干净，因为皮肤的分泌物对神经和肌肉是有害的。 　　四、用镊子夹住脊柱将标本提起，然后用普通剪刀沿正中将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，使之完全分离；或用单面刀片沿正中将脊柱和耻骨联合处切开（注意勿伤坐骨神经）。把标本放入盛有任氏液的培养皿中