幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究.pdfVIP

· 538 · 成都医学院学报2014年第 9卷第 5期 JournalofChengduMedicalCollege，2014，Vo1．9，No．5 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／51．1705．R1546．O11．html doi：10．3969／j．issn．1674—2257．2014．05．004 论 著 幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及 纯化工艺研究* 潘 兴 。，王保 宁 ，杨 靖。，李健春 ，祝 捷。，周永君 ，王红仁 ，李明远 ，李婉宜 1．四川大学华西基础 医学与法 医学院 微生物教研室(成都 610041)； 2．四川万可泰生物技术有限责任公 司(成都 610041)；3．湖北 医药学 院 微生物教研室 (十堰 442000) 【摘要】 目的 初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌 (BIB)的高密度发酵及其蛋 白纯化工艺。方法 以摇瓶发酵结果为基础 ，放大工艺至 5OL发酵罐 中，对影响 目的蛋 白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种 量、诱导剂浓度 、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证 ；并利用 rBIB蛋 白高等 电点特性 (pI=9．05)，在 pH7．0～7．5的磷酸盐缓冲液中 目的蛋 白带正电荷 ，采用阳离子交换层析进行纯化 ，对 阳离子交换 层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果 经高密度发酵后 BIB菌体产量为 70g／L，蛋白表达量为32 ； rBIB蛋 白经 阳离子交换层析纯化后其纯度为 91．8 。结论 该工艺的初步建立为深入研究 rBIB蛋 白性质及其规 模化生产奠定了基础 。 【关键词】 幽 门螺杆菌；疫苗 ；高密度发酵 ；阳离子交换层析 ；尿素酶 B亚单位 【中图分类号】 R392 【文献标志码】 A ResearchonHigh—DensityFermentationandPurificationofBIB PAN Xing ～，WANGBao—ning ，YANGJing。，LI Jian-chun ，ZHUJie ，ZHOU Yongjun。，WANG Hong—ren ，LIMing—yuan ，LIWan—yi ．1|WestChinaoy’ Preclinicaland ForensicM edicine，Sichuan University，Chengdu 610041，China；2．SichuanVacTechnology Co． Ltd，Chengdu 610041，China；3． Departmentoy’M icrobiology，HubeiUniversity of Medicine，Shiyan 442000，China [Abstract] Objective Tobasicallyestablish theoptimalhigh celldensityfermentationandpurification conditions of the recombinant engineering bacterium BIB of Helicobacter pylori．Method Based on the experimentalresultsobtainedinculturebottle，theBIB wastransferred tofermenterculture．Theeffectsofthe culturemedium ，concentrationsoflactose，activation time，and inductiontimewereanalyzedand optimized．After that，bacteriawerecollected，inclusion bodywaswashe