第二章__清洗与消毒.pptVIP

清洗和消毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。 一、 清洗 ?、清洗目的：去除杂物，降低带菌量 ?、根据洗涤对象的不同，主要分为： ② 刷洗 浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷和优质洗涤剂（加热）刷洗。 ③ 浸酸 刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关键环节。 酸液的配制 清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种： 重铬酸钾63g，浓硫酸1000ml，蒸馏水200ml 强液 重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml 次强液 重铬酸钾l00g，浓硫酸l00ml，蒸馏水1000ml 弱液 2、橡胶用品的清洗 浸泡 2％NaOH煮沸15-20 min 自来水冲洗 1％稀盐酸浸泡30min 蒸馏水/2-3次 3、塑料器皿的清洗 浸泡 脱脂棉清拭/冲洗 2％NaOH浸泡过夜过夜 /3次 流水冲净 自来水冲洗 包 装 包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。 （一）关于有菌和无菌的概念 （三）灭菌、消毒种类 化学消毒方法指使用化学药物杀灭、清除环境中的致病性微生物及其他有害微生物，或者抑制其生长、繁殖。 物理消毒法是指利用物理因素杀灭或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。 1.物理灭菌法 外植体在接种之前，须经严格的灭菌，同时又要注意不损伤外植体。不同灭菌药剂杀菌力不同，故在使用不同的药剂时，需要考虑使用浓度和处理时间，对不同植物种类的不同外植体，处理也有不同。 另外，外植体在进入消毒剂之前，应认真取材及清洗，尽可能地减少其带菌量。 总 结 ◆ 滤过除菌 此法适用于消毒大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体。用孔径0.22微米微孔滤膜可除去细菌和霉菌等。 ◆ 紫外线 适用于无菌室、超净工作台的消毒。 紫外线的波长为200-300nm，最强是在254 nm，6-15平方米最少一只紫外灯，高度要在2.5m以下，湿度45%~60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于30分钟的照射时间。 优点：消毒效果好，面种大，使用方便。 缺点：产生臭氧、气味难闻。 ◆ 煮沸消毒 金属器械和胶塞在水中煮20~30分钟，趁热倾去水分即可使用。紧急情况时使用。 2 化学消毒 化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学药物进行消毒灭菌的方法。实验室地面、桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。 2%煤酚皂溶液（来苏尔） 0.25%新洁尔灭 1%升汞 3~5%甲醛溶液 75%酒精。 附加：外植体除菌注意事项： * * 第二章 清洗与消毒 器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、 不锈钢器皿等） 培养材料洗涤 1、玻璃用品的清洗 在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。 一般玻璃器皿的清洗包括： 浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。 （一）、器皿洗剂 ① 浸泡 初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。培养后的玻璃器皿多附有大量蛋白质，用完后应立即初步刷洗，浸泡在蒸馏水中，注意让水完全进入瓶皿中，不要留有气泡。使用新的器皿应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸(5％)浸泡过夜或煮沸30分钟，中和其中的碱性物质后再清洗。 ①选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。 ②先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。