RNAi技术在医学寄生虫学研究中应用.pdfVIP

第17卷第3期 寄生虫与医学昆虫学报 V01．17，No．3 2010年9月 ActaParasit01．Med．Entom01．Sin． Sep．，2010 doi：10．3969／j．issn．1005-0507．2010．03．012 RNAi技术在医学寄生虫学研究中的应用奉 冯宪敏1 卢思奇2” (1．吉林医药学院，吉林132013；2．首都医科大学，北京100069) 摘要RNAi是指在进化过程中高度保守的、由siRNA(SmallinterferingRNAs)诱发的同源mRNA高效特 异性降解的现象。因其发生在转录之后，故又称为转录后基因沉默(Post—transcriptionalgenesilencing， pTGS)。近年来的研究表明，很多种寄生虫都存在着RNAi现象。RNAi为寄生虫(医学原虫、医学蠕虫) 基因功能的研究和新药靶点的筛选提供了有效的技术平台。 关键词RNA干扰；RNAi；医学原虫；医学蠕虫 Fire等(1998)在研究秀丽小杆线虫 Caenorhabditis 1 elegans基因组工作中发现了RNAi RNAi在医学原虫研究中的应用 现象。迄今，RNAi已成为研究基因功能、新基 因筛选、基因治疗和寻找药物靶点的重要工具， 1．1布氏锥虫 被广泛应用于分子生物学和疾病的基因治疗 布氏锥虫是较早进行RNAi研究的寄生虫。 et (Dykxhoorna1．，2003)。 Elisabet等(1997)在WoodsHole召开的国际分 近年来的研究表明，很多种寄生虫体内都存 子寄生虫学会议上，报告了实验中的一个偶然发 et 在着RNAi现象。RNAi技术已被成功地运用于现(Elisabetta a1．，2004)。而后，Ngo等 寄生虫和媒介昆虫的分子生物学研究。RNAi具 有简便、快捷、高效等优点。不仅可以将其用于 其经构建的转染载体导入布氏锥虫细胞内，结果 寄生虫整个基因家族或某一具体基因的功能研 诱导了虫体细胞微管蛋白表达下调，从而使表型 究，而且还可以利用建立的RNAi文库(RNAi发生改变。但此结果与在秀丽小杆线虫和果蝇观 library)进行大规模高通量的基因组学研究察到的RNAi现象不同，布氏锥虫的RNAi抑制 et 效应持续时间短，且不能传递到子代细胞。 (Kamatha1．，2003；Newmark，2005)。尽管不 少寄生虫和媒介昆虫的基因组测序工作已完成 目前的研究表明，有两种可用于布氏锥虫体 brucei et (如布氏锥虫Trypanosomabrucei、利什曼内表达的dsRNA策略(Elisabettaa1．，2004)。 原虫Leishmaniadonovani和冈比亚按蚊Anopheles这两种策略均为利用四环素(Tet)诱导的启动 gambiae)，但对许多基因的功能并不了解。建立 RNAi文库是认识基因功能的有效途径。RNAi文反的一对四环素诱导的T7RNA聚合酶启动子， 库是人工构建的能通过RNAi诱导抑制众多不同在两启动子中间插入相关基因序列，体内转录产 基因表达的混合文库。人们已在线虫等模式生物 生dsRNA，仅需一步克隆，即使在Tet缺乏的情 的研究中，应用RNAi文库建立了基因可被随机况下也能产生一定水平的dsRNA。至今，在锥 抑制的线虫模型。在此基础上，通过表型筛选， 虫中运用RNAi技术已经