免疫胶体金检验技术在应用中存在问题.pdfVIP

新疆医学2011年第41卷 47 ·经验交流· 免疫胶体金检验技术在应用中存在的问题 刘艳李君莲 摘要：目的：评估免疫层析技术在检验应用中存在的问题；方法：根据免疫胶体金技术及斑点金免 疫渗滤法、胶体金免疫层析法在临床诊断上的应用，分析了该技术存在的问题及优势；结果：免疫胶体金 技术取代了传统标记物，灵敏度和特异性高；结论：稳定性好，操作简便，易于普及推广。 关键词： 胶体金免疫层析胶体金技术基本原理标记技术 1 技术 量分析。(3)使蛋白具有适当的分子量。蛋白分 1．1 免疫胶体金技术是指以胶体金为标记物，应 子量过小(30kD)，形成的蛋白复合体往往是不稳 用于免疫组织化学及免疫分析中，对细胞或某些 定，可短时间内失活。而分子量过大时，被认为影 标本中的多糖、糖蛋白、蛋白质、多肽、激素和核酸 响探针的灵敏度，特别是已知蛋白的结构与活性 等生物大分子进行定位及定性检测的一种免疫学 中心的情况下，去除对活性影响的结构部分是提 技术。 高标记灵敏度，延长探针寿命(防止凝集)的有效 1．2方法虽然免疫胶体金呈现多种多样的应 办法。把分子量过小的蛋白与其它蛋白(如牛血 用形式，但以免疫胶体金为基础研发生产的用于 清蛋白等)结合后，能制备出稳定性更佳的探针。 疾病检测和诊断的快速检测试剂主要分两大类， 当蛋白前处理完成后，接着要确定胶体金与蛋白 结合的最佳pH值。对于理化性质不确定的蛋白 一类是渗滤法(nownmugllimmunodia印ostic immunogold这一步尤为重要。过量的蛋白与不同pH值的胶 test)，或称为滴金免疫渗滤实验(Dot 体金结合后，只有某一特定pH值能够形成结合 6ltmtion∞say)，它可以理解为一种以免疫胶体金 代替酶标抗体的斑点EUSA。另一类是免疫层析最稳定的探针。在高浓度电解质(如NaCl)作用 下不会凝聚。不同蛋白的适宜pH范围的宽窄大 法(immunochromatographic鹪say)，是一种侧向横 now 流形式的免疫实验(htemlimmuIlodia印ostic不相同。一般选择最小适宜pH值为最佳pH值。 test)o 但有些探针的实际情况并不完全如此，最稳定的 胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸 探针并不完全代表活性最好，这要靠实验验证。 附到胶体金颗粒表面的包被过程。用于胶体金标 在确定最佳pH值后，最后要确定最小蛋白量，即 记的蛋白必须要经过前处理，其目的在于(1)去 能够形成稳定探针的蛋白的最小量。如果在制备 除高浓度的盐分，高浓度的盐分往往干扰蛋白与 探针时加人太多的蛋白，不仅造成浪费，而且更为 胶体金的吸附结合，或导致胶体金粒子的凝聚，这 严重的是容易造成探针凝聚，并严重影响标记活 一步往往采用低浓度缓冲液中进行。(2)使蛋白 性。因为探针溶液中的游离蛋白容易抢先与标记 分子尽量分散为单体，冻干蛋白或高浓度蛋白溶 位点结合，起到“封闭”(Blocking)作用，而胶体金 液中蛋白分子往往凝聚为多聚体大分子，可同时 探针标记不上。在标记位点少、被标记物含量较 与多个胶体金粒子结合，影响标记的灵敏度和定 少的情况下要特别注意。胶体金具有很高的动力 作者单位：830049新疆鸟鲁木齐新疆维吾尔自治区胸科医院检验科 万方数据 4