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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (2)有机 溶剂 很多有机 溶剂是蛋白质变性剂，使蛋白质变性后与核酸分开，从而提取出核酸。常用的有机 溶剂变性剂有氯仿和水饱和酚。 (3)蛋白水解酶：用蛋白酶处理DNP/RNP复合物中蛋白质组分的方法比较温和，并可避免剪切和破坏核酸。常用的蛋白酶有溶菌酶、蛋白酶K和蛋白酶E等。 * * 2、多糖等杂质的消除 (1)多糖：采用动物材料提取核酸时，宰杀前饥饿12h；植物作材料提取核酸时，置暗室培养数天，其体内的糖原和淀粉可被消耗掉，有利于核酸的提取。而其它的多糖可用选择性变性的方法沉淀除去。常用的选择变性剂有异丙醇、十六烷基溴化铵或等体积的乙二醇甲醚处理后离心除去。 * * (2)DNA与RNA的分离 ①盐浓 度法：DNA与RNA在不同浓 度的NaCl中的 溶 解 度不同，可利用此性质将两种不同的核酸彼此分离。DNA在高浓 度的盐中 溶 解 度大而RNA在低盐 溶 液中的 溶 解 度 大。 ②酶水解法 * * 3、核酸沉淀 (1)乙醇－盐溶液：核酸的钠盐或钾盐在多数有机溶剂中是不溶解的。在核酸溶液(浓度0.1um/ml)中，加入0.1mol/LNaCl(含0.25mol/LNaAC或2.5mol/LNH4AC)溶液和2倍(对DNA)或2.5倍体积(对RNA)的冷无水乙醇，就可将核酸沉淀出来 有机 溶剂 * * (2)异丙醇：在含DNA（或大分子rRNA）的溶液中加入0.3mol/L NaAC和0.54～1倍体积的异丙醇，放置短时间后，经离心即可得到核酸。而多糖及小分子RNA则分布于上清液中。但异丙醇沸点高，不易从核酸中除去，蔗糖、NaCl等在低温下易与DNA产生共沉淀。 * * 加聚乙二醇(PEG)-0.5mol/L NaCl溶液到核酸溶液中，可使2kb的DNA片段溶液出来。PEG的浓度与DNA片段的分子质量成反比。 聚乙二醇 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * L－门冬酰胺酶的纯化 步骤 总蛋白/g 总活力/U 比活力/(U/mg) 纯化倍数 回收率/% 1粗提液 30g 21000 0.7 1 100 2氧化锰处理 7.64g 15017 2.0 2.8 72 3冰冻融解 5.58g 14872 2.7 3.8 71 4DEAE-纤维素层析 0.113g 5025 44.5 63.5 24 5硫酸铵盐析 0.048g 3367 71.7 102 17 6羟基磷灰石 0.016g 3133 200 286 15 7聚丙烯酰胺凝电泳 0.012g 3100 255 365 15 * * 纯度分析 性质分析 比活性 电泳分析 高压液相或气相色谱 免疫分析 分子质量测定 分子结构测定 * * 非膜过滤 膜过滤 粗滤 微滤(微孔过滤) 常压过滤 加压过滤 减压过滤 超滤 反渗透 电渗析 * * 利用过滤介质而使不同大小、不同形状的物质彼此分离的方法称过滤。 * * 正胶束的结构 * * 一、基本原理：通过改变某些条件或添加某种物质，使某溶质在溶液中的溶解度降低，从溶液中沉淀析出，而与其他溶质分离的技术称沉淀分离。 第一节 基本原理与沉淀类型 盐析沉淀法 等电点沉淀法 有机溶剂沉淀法 金属盐沉淀法 复合沉淀法 选择性变性沉淀法 * * 二、制备蛋白质 (一)盐析法 盐 溶：在低盐浓度条件下，蛋白质的 溶解 度 随盐浓 度的升高而增加的现象称盐 溶。 盐析：在高浓度盐 溶 液中，蛋白质的 溶 解 度 随盐浓 度 的升高而降低的现象称盐析。 * * 蛋白质的荷电性发生了变化 蛋