基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法检测猪霍乱沙门氏菌-分析化学.pdfVIP

第45卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第2期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2017年2月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 217~223 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160572 基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法 检测猪霍乱沙门氏菌 1 2 3 3 *1 黄 震摇 夏诗琪摇 刘道峰摇 刘成伟摇 赖卫华 1(南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,南昌330047) 2 3 (江西省林业科学院,南昌330032)摇 摇 (江西省疾病预防控制中心,南昌330096) 摘摇 要摇 建立了基于免疫磁分离的荧光微球免疫层析法,检测猪霍乱沙门氏菌。 待检样品经免疫磁分离富集 和热洗脱处理后,用荧光微球免疫层析试纸条进行检测。 每毫克纳米磁珠标记30 滋g抗体制备的免疫磁珠, 2 6 对浓度为10 ~10 CFU/ mL 的猪霍乱沙门氏菌的捕获率均大于90%,特异性好;在pH=6 时,以300 滋g/ mg 猪霍乱沙门氏菌单抗11D8鄄D4标记荧光微球,制备免疫荧光微球;以2.0 mg/ mL猪霍乱沙门氏菌单抗5F11鄄 B11喷涂检测线(T线),以1.0 mg/ mL驴抗鼠IgG喷涂质控线(C线),制备免疫层析试纸条。 采用建立的基 5 于免疫磁分离的荧光微球免疫层析方法检测猪霍乱沙门氏菌,在PBS缓冲液中检出限为1.5伊10 CFU/ mL, 5 牛奶中检出限为7.6伊10 CFU/ mL,与直接采用荧光微球免疫层析方法检测相比,检出限分别降低了10倍和 200倍。 本方法可有效富集牛奶中的沙门氏菌,避免了基质干扰,灵敏度大大提高,具有较好的应用前景。 关键词摇 免疫磁分离;荧光微球;免疫层析;猪霍乱沙门氏菌 1摇 引言 [1] 沙门氏菌是一类能够导致人畜共患疾病的食源性致病菌 ,可以引起肠胃炎、伤寒、败血症等多种 [2,3] 疾病 。 传统的沙门氏菌检测方法,需经过前增菌、选择性增菌、分离培养等过程,费时(5 ~7 天)费 [4] [5] [6] [7] [8] 力 。 而其它检测方法,如聚合酶链式反应 、电化学法 、酶联免疫吸附法 和石英晶体微天平法 等,虽然灵敏度较高,但操作繁琐,难以满足现场检测的需求。 [9] [10] [11] 免疫层析法具有简便、快速和灵敏等优势,已广泛应用于食品安全 、医学检验 和环境检测 等领域。 荧光微球(Fluorescent microspheres,FMs)为发射光谱类的新型标记物,能有效消除背景干