重组人糜蛋白酶表达纯化和性质研究.pdfVIP

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2018-08-19 发布于天津
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重组人糜蛋白酶表达纯化和性质研究.pdf

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论著生化药物技术中国生化药物杂志 2014年第2期总第34卷重组人糜蛋白酶表达、纯化和性质研究刘晓，李素霞△ （生物反应器工程国家重点实验室，华东理工大学，上海 200237） [摘要] 目的方法研究重组人糜蛋白酶（human Chymotrypsin）在大肠杆菌中的表达、纯化和部分性质。大肠杆菌 BL 21（DE 3）高效表达目的蛋结果白，表达形式为包涵体，复性后的重组蛋白，通过阳离子交换层析纯化，对纯化蛋白进行性质研究。 SDS分析重组蛋白酶原大小约为 30 KD， % CM-FF 阳离子交换层析纯化后最终活性回收率为 93.7 ，重组酶在 pH 3～pH5 范围内稳定，温度稳定性好，以N-苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(n-benzoyl-l- 结论 tyrosine ethyl ester,BTEE)作为底物时的Km 值为 0.067 mmol/L，紫外最大吸收波长为 281nm。重组人糜蛋白酶工程菌成功表达目的蛋白，并通过复性、激活后获得了活性蛋白，建立了生产该酶的方法。 [关键词] 重组人糜蛋白酶；表达；性质 [中图分类号] [文献标识码] [文章编号] ( ) Q 556+.9 A 1005-1678 2014 02-0144-04 Study on expression,purification and properties of recombinant human Chymotrypsin △ LIU Xiao，LI Su-xia （State Key Laboratory of Bioreactor Engineering，East China University of Science and Technology，shanghai 200237，China） [Abstract] Objective To study the prokaryotic expression, purification and properties of recombinant human Chymotrypsin. Methods The protein was highly expressed in E.coliBL 2 1 (DE 3) as inclusion body. After refolding and activated with trypsin, the activated protein was obtained and purified with ion-exchange chromatography(CM-FF), some properties of the recombinant human chymotrypsin was inves