固相萃取-液相色谱联用测定可乐中的有效成分.docVIP

化学与制药工程学院 综合性化学实验 实验题目：固相萃取-液相色谱联用测定中的有效成分  固相萃取-液相色谱联用测定中的有效成分是近年发展起来一种样品预处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，主要用于样品的分离、纯化和浓缩本实验为综合性实验，意在考查学生在掌握基本理论的基础上，对知识的实际应用，同时通过本实验训练学生的分析技能和方法。重点在于固相萃取法前处理实际样品，以及用高效液相色谱仪测定样品中的目标分析物。难点在于固相萃取法的操作。通过实验使学生掌握固相萃取技术的基本原理和方法。了解高效液相色谱分析方法在实际样品分析中的应用，掌握一般的分析步骤，培养学生综合利用理论知识分析问题和解决问题的能力。固相萃取是一个包括液相和固相的物理萃取过程。在固相萃取过程中，固相对分析物的吸附力大于样品母液，当样品通过固相萃取柱时，分析物被吸附在固体表面，其他组分则随样品母液通过柱子，最后用适当的溶剂将分析物洗脱下来。 SPE操作步骤： I 柱的预处理 为了获得高的回收率和良好的重现性，固相萃取柱在使用之前必须用适当的溶剂进行预处理，预处理除去填料中可能存在的杂质，另一个目的是使填料溶剂化，提高固相萃取的重现性。 II 样品的添加 预处理后，试样溶液被加至并以一定的流速通过柱子。在该步骤分析物被保留在吸附剂上。 III 柱的洗涤 在样品通过萃取柱时，不仅分析物被吸附在柱子上，一些杂质也同时被吸附，选择适当的溶剂，将干扰组分洗脱下来，同时保持分析物仍留在柱上。 IV 分析物的洗脱 用洗脱剂将分析物洗脱在收集管中，为了提高分析物的浓度，可以把收集到的分析物用氮气吹干，再溶于小体积适当的溶剂中。 仪器：LC2030高效液相色谱仪（上海天美）；PhenomenexC18（150×4.6 mm）色谱柱；25微升平头微量进样器；可控温超声仪。 材料：C18固相萃取小柱（500mg/3mL）（北京华尔博科技） 试剂：甲醇（色谱纯）；去离子水；咖啡因标准品；； 1．固相萃取样品前处理过程： 2．按操作说明使色谱仪正常工作，色谱条件： 柱温：室温 流动相：甲醇/水=60/40 流动相流量：1.0 mL/min 检测波长：275nm 进样量：5微升3．咖啡因标准系列溶液配制： mg/L的标准储备溶 mg/L的标准储备溶mg/L的标准储备溶 mg/L的标准储备溶 mg/L的标准储备溶．样品测定：分别注入经固相萃取处理后的样品试液μL，根据保留时间确定样品中咖啡因色谱峰的位置，记下咖啡因色谱峰面积。 mg/L 3.448 316151.813 2 50 mg/L 3.448 1347957.500 3 100 mg/L 3.448 2858012.500 4 150 mg/L 3.448 3712525.500 5 200 mg/L 3.448 5334690.000 6 样品 3.448 705637.313 标注曲线的拟合 由浓度对锋面积作图 可乐中咖啡因浓度计算 Y=25828X+79434 Y=705637.313 求的 X=24.245133 mg/L 七．结果与讨论 （1）可口可乐中的咖啡因浓度为24.245133 mg/L （2）固相萃取的基本原理是什么？在固相萃取中最通常的方法是将固体吸附剂装在一个针筒状柱子里，使样品溶液通过吸附剂床，样品中的化合物或通过吸附剂或保留在吸附剂上（依靠吸附剂对溶剂的相对吸附）。“保留”是一种存在于吸附剂和分离物分子间吸引的现象，造成当样品溶液通过吸附剂床时，分离物在吸附剂上不移动。保留是三个因素的作用：分离物、溶剂和吸附剂。所以，一个给定的分离物的保留行为在不同溶剂和吸附剂存在下是变化的。“洗脱”是一种保留在吸附剂上的分离物从吸附剂上去除的过程，这通过加入一种对分离物的吸引比吸附剂更强的溶剂来完成固相萃取法有什么优缺点？ 与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力