奶牛隐性乳房炎乳房链球菌巢式pcr检测方法的-云南农业大学学报.pdfVIP

云南农业大学学报 （自然科学），２０１６，３１（５）：９５５－９５８ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＤＯＩ：１０１６２１１／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１６０５０２８ 奶牛隐性乳房炎乳房链球菌巢式 ＰＣＲ检测方法的建立 １，２ ２ １ １ １ １ １，２ 蒋成砚 ，刘　杰 ，李桥善 ，周文树 ，唐秀华 ，汪　镜 ，谢　昆 （１红河学院生命科学与技术学院，云南 蒙自６６１１９９； ２云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南 蒙自６６１１９９） 摘要：为研究巢式ＰＣＲ检测奶牛隐性乳房炎链球菌的灵敏度，以本实验室从新鲜奶样中分离并经过生理生化 鉴定的乳房链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为研究对象，提取细菌ＤＮＡ，采用巢式ＰＣＲ技 术，根据细菌１６ＳｒＲＮＡ序列保守区设计通用引物进行第１次ＰＣＲ扩增，再在乳房链球菌１６ＳｒＲＮＡ保守区内 的可变区设计特异引物对４种病原菌进行第２次ＰＣＲ检测。结果表明：巢式ＰＣＲ技术能检测出乳房链球菌 １６ＳｒＲＮＡ保守区的可变区序列，与生理生化鉴定结果一致。该方法能快速有效检测出奶牛隐性乳房炎乳房链 球菌。 关键词：奶牛；隐性乳房炎；乳房链球菌；巢式ＰＣＲ 中图分类号：Ｓ８５８２３２６　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１６）０５－０９５５－０４ ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＮｅｓｔｅｄＰＣＲｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｕｂｅｒｉｓ ｆｏｒｔｈｅＣｏｗＳｕｂｃｌｉｎｉｃａｌＭａｓｔｉｔｉｓ １，２ ２ １ １ １ １ １，２ ＪＩＡＮＧＣｈｅｎｇｙａｎ ，ＬＩＵＪｉｅ，ＬＩＱｉａｏｓｈａｎ，ＺＨＯＵＷｅｎｓｈｕ，ＴＡＮＧＸｉｕｈｕａ，ＷＡＮＧＪｉｎｇ，ＸＩＥＫｕｎ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＨｏｎｇｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｎｇｚｉ６６１１９９，Ｃｈｉｎａ；２ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐｓｗｉｔｈＨｉｇｈ ＱｕａｌｉｔｙａｎｄＥｆｆｉｃｉｅｎｔＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＳｅｃｕｒｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌ，Ｙｕｎｎａｎｈｉｇｈｅｒｅｄｕｃａｔｉｏｎｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ，Ｍｅｎｇｚｉ６６１１９９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｓｅａｒｃｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｈａｔｄｅｔｅｃｔｃｏｗｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌｍａｓｔｉｔｉｓｂｙｎｅｓｔｅｄＰＣＲ，Ｓｔｒｅｐｔｏ ｃｏｃｃｕｓｕｂｅｒｉｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｇａｌａｃｔｉａｅ，ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉａｎｄＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｆｒｅｓｈ ｄａｉｒｙｓａｍｐｌｅｓｗｈｉｃｈｈａｖｅｂｅｅｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｅｓｔｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｉｎｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ，ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌＤＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ｔｈｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｐｒｉｍｅｒｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｂａｃｔｅｒｉａ１６ＳｒＲＮＡｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅｇｉｏｎ，ｎｅｓｔｅｄＰＣＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｎｕ ｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｖａｒｉｏｕｓａｒｅａｓｗｉ