大剂量糖皮质激素对兔体内血小板、内皮细胞微粒变化及凝血功能影响与骨坏死关系的研究.pdfVIP

巧奎目缱关节外科学术研对套☆ 2．基础研究 大剂量糖皮质激素对兔体内血小板、内皮细胞微粒 变化及凝血功能影响与骨坏死关系的研究 四川大学华西医院骨科康鹏德裴福兴沈彬扬静 股骨头缺血坏死凝血机制紊乱学说认为长期大剂量应用糖皮质激素可导致血液高 凝、易拴·同时激素对内皮细胞有损害作用，临床激索型股骨头缺血坏死患者表现为高凝、 高脂、血小板高聚集以及微循环血栓栓塞等表现．但大剂量糖皮质激素el起血液高凝易 栓的原因目前尚不清楚． 囊泡，主要由血小板、内皮细胞、红细胞、淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等产生．微粒由于 其来源、数量、大小，抗原成份不同，故功能状态也各不相同．微粒通过暴露其表面携带负 电荷的磷脂和组织因子(tissue factor，TF)，并传递生物活性因子到其他细胞和微粒，在体 内启动凝血途径而是机体处于高凝状态并产生血栓；同时微粒问的相互作用以及微粒对 细胞同的信号传递过程中，相关细胞产生一些细胞因子、骞日胞黏附因子、生长因子和组织 因子，同时调节内皮细胞功能，由于微粒表面可表达特异性膜糖蛋白并富含有大量的凝血 因子膜受体，可为凝血酶原反映提供催化表面，所以在止血和血栓形成过程中发挥重要的 作用． 本研究以成年新西兰大白兔为实验对象。研究大剂量糖皮质激紊(甲强龙，Z0mglkg) 是否会导致兔体内P．MPs和EMPs发生改变·研究微粒改变与凝血功能增强之同的相关 关系，研究大剂量糖皮质激素导致血液高凝易栓状态的原因． 。 材料与方法 一、实验材料 选取健康成年日本大白兔32只。体重2．67土o．38kg。雌雄不限．随机分为两组。实 验组16只·按20mg／kg臀肌注射甲级强的松龙，1次l对照组按相同剂量同期臀肌注射生 理盐水，1次．动物正常进饮食、正常活动． 二、实验方法 注射前、注射后l天、2周、4周、8周各空应静脉全血2rid．进行凝血功能测定。包括血 浆凝血酶原时间(盯)、活化部分凝血活酶时问(APTT)、抗凝血酶一Ⅲ(^T．一Ⅲ)． ☆奎目缱关节外科学术研对套刀 1_血浆微粒测定：动物禁饮食12h，耳缘静脉或颈内静脉穿刺抽取清晨空腹静脉全血 2ml。真空采血管采血后2小时内在20℃温度下分次离心获得含微粒血浆PBS缓冲液． 度，结果以阳性百分比和相对荧光强度来表示．获取微粒的绝对数量并对相关抗体表达 PE)． 定型．每次检测都用相同的仪器设置．藻红蛋白标记的鼠抗人CD42a(CD42a CDs4(CD54 PE)和异硫氰酸荧光速标记的鼠抗人CD31(CD3l FITC)由联科生物提供． 2．组织学检查：各组分别于注射加强龙和生理盐水后2周、4周、8周各无痛处死4只 PBS+ 动物，取双侧股骨头包括转子问及转子下部分股骨干，用4％多聚甲醛(o．1M 片，厚度Sum．然后分别作HE染色和MSB微血栓染色。各组在显教镜下连续观察50 mm×0．2 个视野(每视野0．265 mm)．计数微血栓数量． 10．0统计软件进行检验，参考范围以95％位数表示． 结 果 一、一般情况 试验组兔注射甲强龙后表现少食少动·神情淡漠反应冷淡，毛发蓬松无光泽，体重增 长缓慢甚至下降，肌肉萎缩四肢变细．部分动物出现腹泻．其中死亡3只，死于腹泻和肺 炎．对照组兔正常进饮食t活动正常，无死亡． 二、凝血功能检查 实验组应用甲强龙后2周PT、Am下降，并随时间的延长持续降低，于4周、8周 时下降最明显，12周时仍处于较低水平；对照组各时间点PT、APTr无明显变化．实验 组各时间点PT值、APTT值与同期对照组值比较有显著性整异(Po．05)． 四、血浆总微粒数 实验组在应用甲强龙后2周，血浆微粒总数即升高，随时问延长持续处于较高的水 平I而对照组虽时间延长。总傲粒数无明显变化．