胆管癌全抗原致敏树突状细胞和细胞因子诱导杀伤细胞共培养体外抑.pdfVIP

中华普通外科学文献 （电子版） 2017 年 月第 卷第 期 （ ） 8 11 4 Chin Arch Gen Surg Electronic Edition , August 2017, Vol. 11, No.4 • • 217 ·论著 · 胆管癌全抗原致敏树突状细胞和细胞 因子诱导杀伤细胞共培养体外 抑瘤活性研究 蒋小峰　袁晓鹏　张大伟　卢海武　温子龙　郑强　刘颂航　薛平 【摘要】目的 通过胆管癌全抗原致敏树突状细胞（DC ）联合细胞因子诱导杀伤细胞（CIK ），探 讨DC-CIK 细胞的形态改变及增殖情况，检测抗原致敏DC-CIK 细胞的抗肿瘤活性。方法 分离 人外周血单个核细胞（PBMC ）后取贴壁细胞作为前体DC ，悬浮细胞用于CIK 培养；经rhGM-CSF 、 rhIL-4 、rhTNF- α诱导DC 成熟；成熟DC 中加入胆管癌细胞株RBE 肿瘤抗原进行致敏，作为抗 原致敏DC 组；经rhIL-2 、IL-1 β诱导CIK 成熟；按DC CIK=1 10、1 20、1 40 的比例进行混合培 养；流式细胞术检测DC 表面标记（CD86、CD83、CD40、HLA-DR、CD1 α、CD80 ）；流式细胞术检测 CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK 共培养细胞表面标记（CD3、CD8、CD56 ）；采用萤火虫萤光素酶 法检测CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK 抑瘤率；采用酶联免疫吸附测定（ELISA ）法对细胞因子 IL-12、IFN- γ的表达水平进行检测。结果 DC-CIK 细胞共培养，流式细胞学技术检测表型发现 + + + + 抗原致敏DC-CIK 组的CD3 CD8 和CD3 CD56 细胞亚型表达均为最高，其次为未致敏 DC-CIK 组， 最低为CIK 组。效靶比为20 1 和40 1 时，致敏DC-CIK 组的抑瘤率明显高于未致敏DC-CIK 组 和CIK 组（ 0.05 ），而效靶比为10 1 时，CIK 组、未致敏DC-CIK 组、致敏DC-CIK 组的抑瘤率差 P 异无统计学意义。抗原致敏DC 较抗原未致敏DC 及诱导前DC 细胞状态好，生长增殖迅速。在抗 原致敏后，致敏DC-CIK 组的细胞因子IL-12、IFN- γ表达水平明显高于未致敏DC-CIK 组和CIK 组（ 0.05 ）。结论 体外异体胆管癌全抗原可有效致敏健康人体DC 细胞分化成熟，表型及增殖能 P 力提高。使用体外致敏DC-CIK 共培养作为效应细胞，具有较高的增殖率，在效靶比相同的情况下， 抗原致敏DC-CIK 对RBE 有更强的杀伤性活性。 【关键词】胆管肿瘤；树突细胞；细胞因子诱导杀伤细胞；肿瘤抑制 Study of dendritic cells co-cultured with cytokine induced killer cells sensitized by cholangiocarcinoma antigen on antitumor acti