白藜芦醇对猪前体脂肪细胞凋亡的作用及机理.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, August 25; 26(8): 1042−1049 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved. 动物及兽医生物技术 白藜芦醇对猪前体脂肪细胞凋亡的作用及机理 张朝，杨扬，庞卫军，孙超，杨公社 西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室，杨凌 712100 摘 要: 旨在研究白藜芦醇对猪前体脂肪细胞凋亡的作用，探讨其分子机制。以50 μmol/L 、100 μmol/L 、200 μmol/L 、 400 μmol/L 白藜芦醇处理猪前体脂肪细胞，采用Hoechst 33258 染色剂染色，光学和荧光显微镜分别观察细胞的形态学 变化。semi-qRT-PCR 和 Western blotting 方法检测凋亡相关基因sirt1 、caspase-3 、bcl-2 、bax 、p53 、NF-κB 的mRNA 和蛋白的表达变化。结果表明，白藜芦醇处理后，前体脂肪细胞出现明显的细胞凋亡，伴随细胞体积缩小，染色质凝 集，核质固缩等特征显现，与对照组相比200 μmol/L 处理组细胞的凋亡率显著升高 (P ＜0.05) 。凋亡相关基因sirt1 、 caspase-3 和bax 的mRNA 和蛋白表达水平显著上调 (P ＜0.05) ，而bcl-2 、p53 、NF-κB 等基因的表达水平明显下调 (P ＜0.05) 。进一步证实白藜芦醇特异性地增加sirt1 的表达活性，而sirt1 的上调影响caspase-3 和bcl-2 家族因子的活性， 同时参与调控p53 和NF-κB 的转录表达。因此，推测sirt1 调控凋亡相关因子表达是白藜芦醇诱导前体脂肪细胞凋亡的 关键原因。 关键词: 白藜芦醇，猪前体脂肪细胞，sirt1 ，caspase-3 Effect and underlying mechanism of resveratol on porcine primary preadipocyte apoptosis Zhao Zhang, Yang Yang, Weijun Pang, Chao Sun, and Gongshe Yang Laboratory of Animal Fat Deposition and Muscle Development , Northwest AF University, Yangling 712100, China Abstract: We demonstrated the effect of resveratrol on porcine primary preadipocytes apoptosis, to study the intracellular molecular mechanism. Porcine primary preadipocyte was treated with different concentration of resveratrol (0 μmol/L, 50 μmol/L, 100 μmol/L, 200 μmol/L, 400 μmol/L). We used optical microscope and fluorescence microscope to observe morphological changes during apoptosis after Hoechst 33258 Fluorescent dyes staining; and RT-PCR and Western blotting to measure the expression of apoptosis-associated gene sirt1, caspase-3, bcl-2, bax, p53 , NF-κB . Primary pread