产甘油假丝酵母稳定期酸胁迫耐受性研究 acidic stress tolerance of candida glycerinogenes in stationary phase.pdfVIP

产甘油假丝酵母稳定期酸胁迫耐受性研究+ 谢涛1，方慧英2，诸葛斌2，诸葛健2 1(湖南工程学院化学化工系，湖南湘潭，411104) 2(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡，214036) 摘 要 研究了产甘油假丝酵母稳定期的酸胁迫耐受性。结果表明．在一定的酸性pH值范围内，pH值降低而 酸胁迫压力增加，可以促进产甘油假丝酵母胞内聚磷酸盐积累，从而保证细胞免受酸胁迫的过度影响，维持较高 甘油生产水平所需的活细胞数；但过高的酸性环境会严重损伤细胞，降低细胞合成聚磷酸盐的能力，从而使细胞 存活率和甘油产量下降。产甘油假丝酵母胞内积累聚磷酸盐，可以增强其对营养饥饿和强酸胁迫等的抵抗力， 从而提高其在生长稳定期的存活率。 关键词 产甘油假丝酵母，酸胁迫耐受性，甘油合成，聚磷酸盐，存活率 耐高渗透酵母Candidagtycerinogenes发酵生产0．1，微量元素溶液1mL／L，pH值不调。 MPa下灭 甘油具有高产量、高得率和高回收率等优点，在我国 培养基灭菌条件：各种培养基于1．08 得到了较好的工业化应用’1。1。在以往的研究中发 菌15min备用。 现，当产甘油假丝酵母发酵进入细胞生长稳定期后， 1．3发酵方法 发酵液pH值下降至3．0左右甚至更低，而甘油生产 从刚转接培养好的新鲜斜面种子上挑取1环菌 仍能维持在较高水平¨。2’41。那么，是什么原因维持 株，接人500mL摇瓶中(种子培养基装液量为50 细胞在如此强的酸性环境中依然具有足够的甘油合 G-l L 成能力呢?Mcgrath等”1曾研究了C．humicola h。按5％(v／v)的接种量将种子培养液接人装有5 对酸性pH值的反应，结果发现因胞内聚磷酸盐(Pol— 110)中 合成发酵培养基的7L发酵罐(美国BIOFLO yP)的积累而使其细胞存活率维持在较高水平，但没 r／ 进行发酵，发酵条件为温度32℃、搅拌转速550 有提及对其产量性状的影响。为此，本研究使用含 rain、通风量1vvm，从发酵第24h(细胞生长稳定期) NaCl30 L发 g／L、KH，PO。1．6g／L的合成培养基在7 开始控制恒定pH值。 酵罐中发酵，考察生长稳定期pH值对产甘油假丝酵 1．4甘油测定 母胞内聚磷酸盐(Polyp)积累、细胞存活率与甘油合 采用高碘酸钠．变色酸法…。 成的影响。 1．5 细胞生物量与细胞存活率测定 1 材料与方法 细胞生物量采用干重法，以菌体干重(DCW)表 示。41。细胞存活率采用血球计数板法，存活率以活 1．1 菌种 细胞数与总细胞数之比表示。 产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes) 1．