超滤法分离酪蛋白酶解物中的ace抑制肽 study on uf for the separation and purification of angiotensin converting enzyme inhibitory peptide.pdfVIP

超滤法分离酪蛋白酶解物中的ACE抑制肽芒 姜瞻梅 田 波 霍贵成 (东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，东北农业大学食品学院，哈尔滨，150030) 摘 要 采用不同截留分子质量的超滤膜对酪蛋白酶解物中ACE抑制肽进行初步分离，确定了超滤的条件，并 ku和3ku的超滤膜能不同程度地提高 测定超滤前后酶解物的ACE抑制活性。结果表明，截留分子质量为10 ku的超滤膜能更有效地提高其ACE抑制活性，并且超滤液半抑制浓度值 酪蛋白酶解物的ACE抑制活性，但3 mg艋L。证明超滤技术可作为一种分离ACE抑制肽的手段。 (IC50)为0．46 关键词ACE抑制肽，超滤，酪蛋白 en— SMB一20型超滤设备，中国科学院上海原子能 血管紧张素转换酶(angiotensinconverting zyme，ACE)在人体血压调节过程中起重要作用。研究所；XW一80A型旋涡混合器，上海医科大学仪 ACE抑制肽通过抑制血管紧张素I向血管紧张素II器厂制造；UV一2401PC型分光光度计，日本岛津； 转换以及阻止ACE降解缓激肽而起降血压的作 LGl0—2．4A离心机，北京医用离心机厂。 用…。酪蛋白经过不同蛋白酶作用后，可以得到具 1．3试验方法 有较高ACE抑制活性的酶解物，由于酶解物的成分 1．3．1酪蛋白酶解物的制备 复杂并且具有ACE抑制活性的肽分子质量都比较 精确称取一定量的酪蛋白，采用磷酸盐缓冲液将 小，因此，选择经济合理的分离方法富集ACE抑制肽 是非常必要的【2J。超滤技术由于分离操作过程没有 性蛋白酶，进行水解反应。整个水解过程中不断搅 相变，可在较低的温度下操作，节省能耗，成为分离技 拌，并不断加入1 术中用途最广的方法之一。Mullally等采用超滤技0．05范围内。当达到预定时间后，将反应体系在 术分离去除大分子肽段，可提高具有ACE抑制活性 95℃条件下保持20min后中止反应。将酶解物离心 的肽含量[3，4】。Jang等对牛肉酶解物进行超滤分离30min，去除沉淀，取上清液。 可提高其ACE抑制活性【5 J。Hyun等采用不同截留1．3．2超滤分离提取 分子量的超滤膜对血浆蛋白酶解物处理可大大提高 超滤过程的特性指标主要是膜通量(J)。即单位 分离物的ACE抑制活性∞J。 时间内通过单位膜面积的透过物的量，即： 文中采用超滤技术比较了不同截留分子质量的 J=忐 超滤膜对分离酪蛋白酶解物中ACE抑制肽作用效 果，并探讨了超滤工艺条件，为酪蛋白源ACE抑制肽 的工业化生产提供依据。 口。为超滤所用的时间(min)。 1．3．3ACE抑制活性的检测方法 1 材料与方法 1．1原料 修改。 血管紧张素转化酶(ACE)，Sigma公司产品，美 1．3．4半抑制浓度(IC50)的测定 国；马尿酰组氨酰亮氨酸(HHL)，Sigma公司产品， 称取一定质量样品配制成不同浓度的溶液，按照 美国；新鲜牛乳，万家宝乳品有限公司提供；As．1398 以浓度为横坐标，抑制活性为纵坐标绘成圆滑的曲 中性蛋白酶，江苏省无锡市酶制剂厂。 线，从曲线中计算出IC50值[3，8|。 1．2设备 2 结果与讨论 第一作者：博士，讲师(霍贵成为通讯