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探寻qPCR的成败分水岭 北京全式金生物技术有限公司 荧光定量PCR开篇 荧光定量PCR的理想结果 荧光定量PCR的理想结果 荧光定量PCR的起源 1992年，日本人Higuchi在一次报告中提出荧光实时定量PCR技术。当时使用的标记染料是EB，因其可以插入到双链核酸中受激发光。这样，在普通PCR仪的基础上再配备一个激发和检测的装置，第一台实时定量PCR仪就诞生了。在PCR反应的退火或延伸时检测掺入到双链核酸中EB的含量就能实时监控PCR反应的进程，考虑到PCR反应的数学函数关系，结合相应的算法，通过加入标准品的方法，就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。 1995年，美国的PE（Perkin Elmer）公司率先研发出来TaqMan技术，第二年，首台荧光定量PCR检测系统问世。随后，这种通过检测PCR每个循环的荧光强度，使用某些特定的数学算法用于核酸定量的技术开始得到广泛应用。 荧光定量PCR 的优点 定量类型的选择 定量—对某一样品的量的具体确定—绝对定量 定量—不同时间、不同处理的比较—相对定量 荧光定量PCR的实验方法 荧光标记引物和探针：利用荧光共振能量传递或其它一些荧光淬灭的形式来保证仅在扩增产物出现时特异的荧光才能被监测到。 DNA 结合染料 荧光定量PCR的实验方法 荧光定量PCR的主要方法 TaqMan 探针法 D