发酵液中L-异亮氨酸提取工艺研究.pdfVIP

第 39卷第4期 2010年10月 发 酵 科 技 通 讯 发酵液中L一异亮氨酸提取工艺研究 白亚磊 冯 宁 孙家凯 徐庆 阳 谢希贤 陈 宁 (天津科技大学生物工程学院 天津 300457) 摘 要 ：为 了从发酵液 中高效的提取 L一异亮氨酸，文本对发酵液 中L一异亮氨酸的分离提取工艺作 了初步研究。分别考察 了蛋 白去除温度及时间、活性炭用量、脱色时间、脱色温度、发酵液pH值对L一异 亮氨酸分离提取效果的影响。最终确 定 了提取 的工艺条件 ．即蛋 白去除温度及 时间分别为90℃和 lOmin、活性炭添加量为2％、脱色温度为60℃、脱色时间为25rain、脱色时的最佳 pH为4．7。在此工艺条 件下，L一异亮氨酸提取收率为94．3％ ，产品纯度 高达 96．5％。 关键词：L一异亮氨酸 分离提取工艺 活性炭 脱色 L一异亮氨酸是人体 8种必需氨基酸之一 ．又 器有限公司 是 3种支链氨基酸之一 ，因其特殊的结构和功能， 旋转蒸发器(RE一52A)32海雅荣生化设备仪 在人类生命代谢中具有特别重要 的地位。L一异亮 器有 限公司 氨酸除用于一般营养型复合氨基酸输液、要素膳 循环水式多用真空泵(SHB一Ⅲ)郑州长城科工 外，还作为特殊的支链氨基酸之一被大量用于配 贸有 限公司 制治疗型特种氨基酸输液如肝安、肾安氨基酸输 真空干燥箱(DZF--6020)~海博迅实业有限公司 液，特别是 以L一异亮氨酸为主要原料生产的高支 离心机 (LD5—10)北京医用离心机厂 链氨基酸输液、肝安糖浆、肝醒灵 口服液等对治疗 1．2 方法 各种肝脏疾病具有显著疗效。人体缺乏 L_异亮氨 1．2．1可溶性蛋白和色素去除率的计算f41 酸，将导致食欲不振、体质下降、贫血及其它功能 可溶性蛋 白去除率=1一A280nm／A280nmx 障碍。因此，其用量逐年增长1,【2,31。目前，在工业生 100％ 产上主要应用发酵法生产 L一异亮氨酸。 色素去除率=1一A480nm／A480nmxlO0％ 生产上分离提取氨基酸 的方法有很多种 ，如 式 中A和A为除蛋白前后溶液的吸光度。 离子交换法 、膜分离技术等 。本文采用加热除蛋 1．2．2 工艺流程 白、等电点有机溶剂法从发酵液 中提取 L一异亮氨 1．2．2．1 发 酵液一 加 热 到 90℃维持 10min一 酸。确立 了最适蛋 白去除温度及时间、活性炭用 4500rpm离心 l0min-+调 pH到4．5加入 2％的活 量 、脱色时间、脱色温度 、发酵液 pH值对 L一异亮 性炭 60℃恒温维持 25min一真空抽滤 减压浓 氨酸分离提取的影响。 缩一调 pH到6．0，以 1：1的体积 比加 95％酒精 ， 4℃静置育晶3h一真空抽滤得粗品 1 材料与方法 1．2．2．2 上述所得粗品 IO0~C烘干一溶解后加热 1．1材料 再次除蛋 白一活性炭脱色一减压浓缩一重结晶得 L一异亮氨酸发酵液由天津科技大学代谢工 L一异亮氨酸晶体。 程研究室提供 ；氨基酸专用活性炭 ；滤纸。 2 结果与讨论 1．1．1仪器 752紫外可见分光光度计 上海菁华科技仪 2．1 蛋白去除温度及时间的确定