DNA甲基化闵雄.ppt

发育与疾病中的表观遗传学：原理与技术 主讲人：闵雄;表观遗传学;Conrad Waddington 1905-1975;第一节 DNA 甲基化;DNA甲基化 和转录调控;什么是二核苷酸CpG?;由胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)组成的一个2个核苷酸的链，当中的p是C和G之间的磷酸CpG岛就是由胞嘧啶(C)和鸟嘧啶(G)组成的串联重复序列;DNA甲基化和CpG Islands;CpG岛的形成;基因印记;骡和駃騠 前者又称马骡，是公驴与母马杂交的后代，体大、耳小而尾部蓬松; 后者又叫驴骡，是公马与母驴杂交的后代，相对来说体小、耳大而尾毛较少。这个现象表明，来源于不同性别亲本的遗传物质在后代表达的功能可以有差别。这就是基因印记。;DNA甲基化机制?;哺乳动物细胞中已知有活性的 DNMT 有 3 种 ，它们是 DNMT1 、DNMT3a 、DNMT3b 。 DNMT1 的主要功能是作为 DNA 复制复合物(DNA synthesome) 中的组分 ，催化子链 DNA 半甲基化位点甲基化 ，维持复制过程中甲基化位点的遗传稳定性； DNMT3a 和 DNMT3b 主要催化从头甲基化 ，以非甲基化的 DNA 为模板 ，催化新的甲基化位点形成 ，在胚胎发育中起重要作用。;1998年,英国爱丁堡大学的Nan和美国马里兰州的Johes等各自独立发现，选择性地结合于甲基化DNA上的特异的转录抑制因子MeCP2与组蛋白脱乙酰化酶 (histone deacetylase,HDAC) 在细胞中可存在于同一个复合 物中。;改变已有的甲基化必须要有一种机制可移除已存在的甲基化;2009年，斯坦福大学医学院的院士Helen M. Blau证明诱导哺乳动物IPS需要AID蛋白参与启动细胞的DNA去甲基化，并启动细胞核重新编程过程。 为了研究IPS诱导过程中的相关机制，他们构建了一个异核体细胞（融合了小鼠胚胎干细胞和人类成纤维细胞），这种异核体诱导的速度比正常的体细胞诱导速度快很多，仅需1天时间，诱导效率高达70%。;2010年，剑桥的M. A zim Surani和Wolf Reik先后在Nature和Science上报道，AID（活化诱导胞嘧啶脱氨酶）基因敲除的精子的去甲基化受到显著影响。 甲基胞嘧啶通过脱氨作用形成的尿嘧啶，尿嘧啶只能在RNA出现，如果在DNA出现，细胞会触发碱基切除反应。 他们都证实AID参与的去甲基化是通过对甲基化胞嘧啶的脱氨作用启动碱基切除修复完成的。;在近期的《细胞》（Cell）杂志上，Heintz、Kriaucionis和同事们报告称，5hmC标记对于基因表达的影响与5mC相反，并在小鼠的健康脑细胞中鉴别了5hmC信号检测及广泛解读的机制。众所周知，广泛的肿瘤细胞中都存在5hmC分布改变，这些研究发现可能对于癌症研究具有重要的价值。 ;人体的几乎每个细胞都携带着一份完整的人类基因组。那么人类眼中的感光细胞为何会与心脏或脾脏的细胞如此的不同？;答案当然是因为每种细胞类型只选择性表达了一套独特的基因，而主动沉默了与它的功能无关的基因。 科学家们很早以前就知道，那样的基因沉默是借助于对DNA碱基胞嘧啶的化学修饰，生成称作5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine ,5mC）的一种“表观遗传”标记而实现。 这一标记适当分布不仅对于胚胎发育，且对于许多正常的生物学过程均至关重要。相反，它的错误分布会促成广泛的癌症进化。;5-羟甲基胞嘧啶;发现历史:5-羟甲基胞嘧啶最早于1952 年在噬菌体DNA中被发现, 它能被糖基转移酶介导糖基化修饰, 从而使噬菌体基因组在进入宿主后能抵抗宿主限制酶的降解。;1972年Penn等在哺乳动物大鼠、小鼠?以及卵生动物牛蛙脑组织提取的DNA中也发现了羟基化修饰的胞嘧啶, 约占DNA总胞嘧啶的15% 左右，但此后的研究未能重复这一结果。;2009 年，Tahiliani和Kriaucionis的两个研究团队在同一期Science中分别报道了5hmC 在人、小鼠大脑及胚胎干细胞中有着丰富表达, 羟甲基化的概念才又一次进入人们的视野并得到了重视。目前5hmC是继5mC被称为“第5 个碱基”之后的“第6 个碱基”。 ;第二节：核小体和组蛋白修饰;组蛋白修饰机制;第三节：组蛋白甲基化的研究进展;组蛋白于1834年由德国科学家A.科塞尔发现。早在1888年德国化学家科塞（A.Kossel）已从细胞核中分离出组蛋白，并认识到它们作为碱性物质应在核中与核酸结合，但直到1974年才了解组蛋白的确切作用。一些实验室随后证明组蛋白以独特的方式构成核小体的组分。 ;1 　组蛋白甲基转移酶;;;H32 K9 甲基化与异染色质的形成小鼠中的 suv39h1 和 suv39h2 两种基因编码的甲基转移