降钙素基因相关肽对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及蛋白激酶Cα信号途径的调控作用.pdf

中国危重病急救医学 2010年 5月第 22卷第 5期 ChinCritCareMed，May2010，Vo1．22，No．5 ·263 · · 论 著 · 降钙素基因相关肽对高氧暴露下肺泡 Ⅱ型上皮细胞 增殖及蛋白激酶Ca信号途径的调控作用 付红敏 李利 王亚军 汤春辉 米弘瑛 许峰 匡凤梧 【摘要】 目的 探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对高氧暴露下肺泡 Ⅱ型上皮细胞 (AECⅡ)的促增殖作 用及其蛋 白激酶Ca／核转录因子一B(PKca／NF—B)信号途径的调控机制。方法 将原代分离培养的孕21d胎 鼠AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组。空气组和高氧组分别在 21 0 或85 0。中暴露 24h；高氧 CGRP组在高氧处理前加入 CGRP，高氧 CGRP拮抗剂组 同时加入 CGRP和CGRP受 体拮抗剂 CGRP8—37。采用 四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和不同细胞周期 细胞比例；蛋 白质免疫印迹法(Westernblotting)检测胞膜和胞质PKCu的表达；激光共聚焦检测NF—KBp65 的细胞核表达 。结果 高氧组 GO／G1期细胞 比例 明显高于空气 组 [(80．652±6．253) 比(45．825± 2．899)％]，而细胞增殖率 [(68．752±5．766) 比(100．000士6．682) ]及 S期、G2／M 期细胞 比例 [分别为 (14．198土4．785) 比(27．470土2．775) ，(5．148±1．688) 比(26．708±1．863) ]均低于空气组 (均 P 0．01)。CGRP干预可提高高氧暴露 AECⅡ的增殖能力 [(94．813±6．102) ]，使 s期和 G2／M 期细胞增多 [(30．547土9．861) ，(17．668±9．509)％，均 P0．013。高氧组胞膜与胞质 PKCa比值显著低于空气组 (0．63±0．10比 1．00土0．09)，而 NF—KBp65的荧光强度高于空气组 (22．98±2．20比 14．54士2．35)；高氧 CGRP组胞膜与胞质 PKCa比值 (1．41±0．23)及核 内NF—KBp65荧光强度 (35．38士3．37)均高于高氧组 (0．63±0．10，22．98±2．20)及高氧 CGRP拮抗剂组 (O．74±0．10，24．88±1．81，均 P0．01)。结论 cGRP 可促进高氧暴露下AECⅡ的生长增殖；PKCa参与了CGRP对细胞作用的信号传递，而NF—B是PKCa的下 游分子之一，仅部分执行 PKCa的效应 。 【关键词】 肺泡 Ⅱ型上皮细胞； 蛋 白激酶 c； 核转录因子一xB； 降钙素基因相关肽； 高氧 The proliferation—prom oting effectsof calcitonin gene—related peptideon type Ⅱ alveolar epithelialcell exposedtohyperoxiamediatedbyproteinkinaseCapathway FU Hong—min ，LILi，WANGYa—jun， TANG Chun—hui，MIHong—ying，xU Feng，KUANG Feng—wu． DepartmentofPediatrics，theFirst PeoplesHospitalofYunnanProvince，Kunming 650032，Yunnan，China Correspondingauthor：X Feng，Email：xufeng9899@yahoo．tom．cn [Abstract] Objective Toexploretheeffectsofcalcitoningene—relatedpeptide(CGRP)ontype Ⅱ alveolarepithelialeell(AEC Ⅱ)exposedtohyperoxia，andtodeterminewhetherthemechanism ismediated byproteinkinaseCa／nuclearfactor—KB (PKCa／NF—KB)signalpathway．Methods AEC Ⅱwereisolatedf