教案4、液相色谱.ppt

离子对色谱 强极性有机酸、有机碱的分离分析 将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X -后；在两相间分配。 核酸、核苷、儿茶酚胺、生物碱的分离 Page * * 固定相 * * 试样注入到填料中心之内1～2mm 处，减少柱前扩散； 连接管的体积和检测器的死体积应尽可能小。 * 用电导检测器对阳离子和阴离子混合物作常量和痕量分析的色谱法。分析时在分离柱后串接一根抑制柱，来抑制流动相中的电解质的背景电导率。 * * 将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X -后；在两相间分配。 * 现 代 仪 器 分 析 MODERN INSTRUMENTAL ANALYSIS Apple Lu Page * 3 高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography Page * Page * HPLC特点：经典液体柱色谱引入气相色谱法理论 高压：突出特点； 150×105 ～350×105 Pa 高速：20h1h 高效：GC-1000塔板/m HPLC—3万塔板/m(固定相) 高灵敏度：UV；AFS Page * HPLC与GC差别 相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚 物的样品不可检测 占有机物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的样品， 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子 型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80% Page * 2．流动相差别 GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、 改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） Page * 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 3-1 H = A + B/u + C·u 液体与气体的不同？ Page * 1. 涡流扩散项He He = 2λdp 一定 2. 纵向扩散项Hd Hd = CdDm / ? 试样分子本身运动所引起的纵向扩散，当线速度大于0.5 时，可忽略 3. 传质阻力项：主要因素 Hs = Csdf2 ? / Ds 试样分子从流动相进入到固定液 Hm = Cmdp2 ? / Dm Hsm = Csmdp2 ? / Dm 固定相传质阻力 流动相传质阻力 流动的流动相传质阻力 滞留的流动相传质阻力 （传质过程中主要作用） Page * H= 2λdp + CdDm / ? + Csdf2 ? / Ds + Cmdp2 ? / Dm + Csmdp2 ? / Dm A B C 主要因素：传质相 C 提高柱效有效途径：减小粒度 Hmin小一个数量级 柱外展宽：柱前峰展宽；柱后展宽 试样注入到填料中心之内1～2mm 处，减少柱前扩散； 连接管的体积和检测器的死体积应尽可能小。 Page * 主要类型与分离原理 basic principle and main sepa