高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件.pdfVIP

第 33卷 第 12期 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 V_01．33 No．12 2013年 12月 JournalofCentralSouthUniversityofForestry Technology Dec．2O13 ____ I Ej 同 产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件 李 淼，曾柏全，冯金儒 (中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南 长沙 410004) 摘 要：研究青霉菌PenicilliumQ5和枯草芽孢杆菌BacillussubtilisK3原生质体制备与再生的最佳条件。采用 酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长，酶浓度，酶解时间和 灭活时间进行了优化。亲本菌株O5，培养液中加入浓度0．5％甘氨酸和含量 10％的蔗糖处理后，在质量浓度均 为 10mg／mL的溶菌酶和蜗牛酶 (1：1)酶解作用下，35℃处理 3h，原生质体生成量达到最大值，为 7．35×10。 cfu／mL；亲本菌株 K3，用4U／mL的青霉素处理，在 1mg／mL的溶菌酶作用下，35℃处理 1h，原生质体形成 率与再生率的乘积达到最大值，此时K3原生质体量为 1．46×10cfu／mL。青霉菌在 65℃热灭活的时间为 lh， 紫外灭活时间为3min；枯草芽孢杆菌在65℃热灭活的时间是2．5h，紫外灭活时间为5min。这为后续原生质体 融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。 关键词：青霉菌O5；枯草芽孢杆菌K3；原生质体制备；原生质体再生；原生质体灭活 中图分类号：$718．8 文献标志码：A 文章编号：1673—923X(2013)12一ol74—07 ProtoplastpreparationandregenerationconditionsofPenicilliumQ5and Bacillussubtilisk3 LIMiao，ZENG Bai—quan，FENGJin—ru (SchoolofLi~ofScienceandTechnology,CentralSouthUniversityofForestryandTechnology,Changsha410004，Hunan，China) Abstract：Theoptimum conditionsfortheformation，regenerationanddeactivationofprotoplastsofPenicilliumQ5andBacillus subtilisK3werestudied．Thehigh—qualityprotoplastsofPenicilliumQ5andBacillussubtilisK3havebeenpreparedbyusingenzymatic hydrolysismethod．Throughthetests，theconditionsincludingmicrobialgrowth，thecontentofcellulaseandtimeofrreactionandthe optimalinactivatedtimewereoptimized．TheamountofprotoplastfromPenicilliumQ5gainedflmaximum，7．35×10cfu／mL，andthe correspondingaboveusedvalueswere0．5％Glycolic，10％sugar，10mgm／Llysozymeandsnailenzyme(1：1)，3hours，and35℃ Whiletheproductofprotoplastpreparationandregenerationfrom BacillussubtilisK3reache