一测多评技术在热痹消颗粒质量评价中应用.docVIP

一测多评技术在热痹消颗粒质量评价中应用 　　摘要：目的 建立一测多评法的方法学考察方式，验证该方法在中药复方制剂热痹消颗粒质量控制中应用的可行性和技术适用性。方法 以热痹消颗粒为研究对象，建立小檗碱与黄柏碱、药根碱、巴马汀的相对校正因子，并将该校正因子应用于上述4种生物碱的含量测定，实现一测多评；同时采用外标法测定4种生物碱的含量，比较计算值与实测值的差异。结果 建立了热痹消颗粒中4种生物碱类成分一测多评法方法学的考察模式，一测多评法对不同的色谱柱和仪器的计算值与外标法实测值之间没有明显差异。结论 以黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱为指标，采用一测多评法控制热痹消颗粒质量是可行的。 关键词：一测多评法；相对校正因子；高效液相色谱法；热痹消颗粒 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0060-04 热痹消颗粒是江苏省中医院院内制剂，由黄柏、萆?等8味中药组成，具有清热解毒、泻浊通络、消肿定痛之功效，主 治急性通风性关节炎及高尿酸血症、痛风性肾病等。黄柏中的生物碱类成分黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱均为活性药理成分，其中小檗碱对照品价廉易得，而黄柏碱对照品价高。目前，黄柏药材、饮片及含有黄柏的成方制剂主要以单指标成分（巴马汀或小檗碱）来控制质量，巴马汀或小檗碱在芸香科和毛茛植物中普遍存在，仅以单指标成分来进行质量控制，无法真实全面地评价黄柏及其成方制剂的内在质量。本试验采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定了黄柏中黄柏碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的含量，并利用上述4种生物碱内在的函数和比例关系，采用“一测多评”的方法[1-4]，通过验证试验，以小檗碱为内标成分，得出黄柏碱、巴马汀、药根碱与小檗碱之间的相对校正因子，计算出这4种生物碱的含量，为真实评价黄柏以及含黄柏的中成药的质量提供全新的分析模式。 1 仪器与试药 Waters 2695-2996高效液相色谱仪，包括Empower工作站（Waters公司）；Agilent 1260高效液相系统，包括Agilent chemstation工作站（Agilent公司）；Agilent 1100高效液相系统，包括Agilent chemstation工作站（Agilent公司）、Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）、Welch Materials C18柱（250 mm×4.6 mm，18.5 ?m）、Hedera C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 ?m）；BP211D型十万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）；KH-400KDB型高功率数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。 热痹消颗粒，江苏省中医院制剂室生产；黄柏碱对照品，上海同田生物技术股份有限公司，批盐酸小檗碱对照品，中国药品生物制品检定所，批号110713-200208；药根碱对照品，上海源叶生物技术股份有限公司，批盐酸巴马汀对照品，中国药品生物制品检定所，批号110735-200907；乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 一测多评方法学考察 2.1.1 色谱条件 Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相A为乙腈，B为乙腈-0.1%磷酸水（36∶64，每1 000 mL中加入2 g十二烷基磺酸钠），梯度洗脱程序见表1。流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长284 nm。在上述色谱条件下，各组分分离度良好。 2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称取黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱各对照品适量分别置于25 mL量瓶中，制得各对照品的单一溶液。再分别精密吸取各对照品适量，置同一10 mL容量瓶中，流动相B溶液稀释至刻度，制得混合对照品溶液（黄柏碱62.23 ?g/mL，药根碱28.0 ?g/mL，巴马汀30.2 ?g/mL，小檗碱99.0 ?g/mL）。 2.1.3 供试品溶液的制备 取热痹消颗粒，研细，分别称取约1 g，精密称定，置于25 mL容量瓶中，加入流动相B，超声处理30 min（功率300 W，频率50 kHz），取出，放冷，用流动相加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.1.4 线性范围考察 精密吸取上述混合对照品溶液2、4、6、8、10、15、20 ?L进样分析，以进样量（?g）对峰面积积分值进行回归处理，分别得黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱回归方程Y=0.918 1X-2.520（r=0.999 9）、Y=2.891X-4.456（r=0.999 9）、Y=2.885 1X-3.450 5（r=0.999