自由溶液和筛分介质条件下芯片DNA瞬间等速电泳预浓缩的比较.pdfVIP

第 38卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 8期 2010年 8月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1100～1104 DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01100 自由溶液和筛分介质条件下芯片 DNA 瞬间等速电泳预浓缩的比较 刘大渔 梁广铁 雷秀霞 周小棉 (广州医学院附属市一人民医院检验科临床化学技术研究室，广州 510180) 摘 要 利用芯片电泳方法考察瞬间等速电泳一筛分电泳偶联分析的结果，比较 了自由溶液和筛分介质 中 DNA瞬间等速电泳的预浓缩效果。结果显示 ，相比较于筛分介质条件，自由溶液瞬间等速电泳有利于改善预 浓缩和后续筛分电泳分离效果。对此结果的解释是 ：自由溶液条件下DNA迁移速度的提高可以延长瞬间等 速电泳持续时间，有利于提高预浓缩效率。此外，样品压缩区带在 自由溶液一筛分介质界面的二次富集也是预 浓缩效果得到改善的原因之一。 关键词 芯片电泳；等速电泳 ；预浓缩 ；脱氧核糖核酸 1 引 言 在线预浓缩是一种简便有效的提高毛细管电泳和芯片电泳检测灵敏度的手段…。用于DNA在线 预浓缩的方法包括碱堆积 (Basestacking) 、场放大堆积 (Field—amplifiedsamplestacking) 和等速电泳 (Isotachophoresis，ITP)预浓缩 等。瞬间等速电泳(Transientisotachophoresis，tlTP)是一种简化的等 速电泳预浓缩方式 ，以样 品基质 中的离子为前导或尾 随离子 ，可 以简化操作并 良好地兼容高盐样 品 ’。通过偶联tlTP和筛分电泳 (CGE)，可以简单有效地实现高盐 DNA样品的预浓缩和分离 。 瞬间等速电泳预浓缩效果取决于前导离子浓度和等速电泳持续时间，而后者由样品基质与样品离子以 及样品基质与背景缓冲液中同离子的迁移速度差决定 1o]。Liu等 发现，筛分介质条件下较低的DNA 迁移速率是限制 tlTP预浓缩效率的因素，提高样 品迁移速率有利于改善预浓缩效果；Schans等_1指 出，从 tITP到CGE的分离模式转换可以在 自由溶液-筛分介质界面实现。微流控芯片具有设计灵活的 特点和优势，非常适合于实现这种复合式分离；Qil1副和Wang131等分别报道了基于芯片的自由溶液ITP 或 tlTP与CGE偶联用于DNA预浓缩和分离。这些研究结果显示 自由溶液 中DNA样品具有更高的预 浓缩效率，有利于提高后续 CGE的分离效果。 本研究采用激光诱导荧光检测芯片电泳方法，比较了在 自由溶液和筛分介质条件下芯片DNA瞬间 等速电泳预浓缩效果并分析了相关机制，为改善 tlTP与CGE偶联分离效果进行了有益的尝试。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 涂有正光刻胶的玻璃基板(6．5cm×6．5cm，长沙韶光铬版有限公司)。咪唑，Ⅳ一(乙一羟乙基)哌 嗪一Ⅳ一二乙烷磺酸 (HEPES，美 国Sigma公司)；羟丙 甲基纤维素 (Hydroxyprolymethy|cellulose，HPMC， 2％水溶液，粘度为4O一60cp，美国Aldrich公司)；qbX174HaeIIIdigests(加拿大Fermentas公司)；10× PCR缓冲液(北京Tiangen公司)；插入式DNA标记染料 GeneFinderM‘(厦门Biovision公司)。 芯片电泳实验在 自行设计和研制的芯片电泳分析仪上完成。该仪器 由芯片电泳平台、光学检测系 统、CCD监测、高压电源控制和操作软件组成，检测方式为共聚焦激光诱导荧光 。 2．2 实验方法 2．2．1 芯片设计和制作 芯片结构如图1所示。图1a包含用于标准芯片筛分电泳(标准 CGE)分离 2009-07-07收稿 ；2009—10-24接受 本文系 “十一五”重大专项 (No．2008ZX10004-004)，国家 自然科学基金(No资助 E—mail：zhouximi@ yahoo．con 第8期 刘大渔等：自由溶液和筛分介质条件下芯片 DNA瞬间等速电泳预浓缩的比较 的十字架结构和用于筛分介质条件下瞬间等速 电泳一筛分电