马尾松钙调素基因的克隆及响应松材线虫侵染的表达特征-林业科学研究.pdfVIP

林业科学研究　２０１４，２７（３）：３２３ ３２８ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１４）０３０３２３０６ 马尾松钙调素基因的克隆及响应松材 线虫侵染的表达特征 １，２ ３ ２ ２ ２ 徐　亮 ，刘振宇 ，吕　全 ，梁　军 ，张星耀 （１．北京林业大学林学院，北京　１０００８３；２．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，北京　１０００９１； ３．山东农业大学植物保护学院，山东 泰安　２７１０１８） 摘要：松材线虫病是由松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）侵染引起的严重病害，引起重大的经济和生态损失。钙 ２＋ 调素（ＣａＭ）是真核生物中Ｃａ 主要传导蛋白，本研究采用 ＲＴＰＣＲ方法，首次从马尾松中克隆获得 ＣａＭ，命名为 ｐｍＣａＭ，并检测了其响应松材线虫侵染的表达特征。序列分析表明：ｐｍＣａＭ完整的开放阅读框核苷酸序列为４５０ ｂｐ，编码１４９个氨基酸的蛋白质；该蛋白含有４个ＥＦｈａｎｄ结构域，具有钙调素的典型特征，与其它植物的ＣａＭ蛋白 均有较高同源性。实时荧光定量ＰＣＲ分析显示：接种松材线虫后３０ １８０ｍｉｎ时间段，马尾松苗根、茎、叶器官中 的ｐｍＣａＭ均下调表达，但不同器官间显著下调表达的时间点存在差异；同时，不同器官ｐｍＣａＭ表达量变化均存在 特异的随时间发展的波动特征，其中发现，根茎ｐｍＣａＭ在松材线虫接种４５ｍｉｎ时均处于表达量高峰。本研究结果 显示ｐｍＣａＭ表达响应了松材线虫侵染，揭示ｐｍＣａＭ可能参与了调控松材线虫马尾松互作早期的钙信号响应。 关键词：松材线虫病；马尾松；松材线虫；ｐｍＣａＭ；克隆表达 中图分类号：Ｓ７９１．２４８ 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＰｉｎｕｓｍａｓｓｏｎｉａｎａｐｍＣａＭ ＲｅｓｐｏｎｓｅｔｏＢｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎ １，２ ３ ２ ２ ２ ＸＵＬｉａｎｇ ，ＬＩＵＺｈｅｎｙｕ，ＬＵＱｕａｎ，ＬＩＡＮＧＪｕｎ，ＺＨＡＮＧＸｉｎｇｙａｏ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８３，Ｃｈｉｎａ；２．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔＥｃｏｌｏｇｙ， ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００９１，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉ’ａｎ　２７１０１８，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｉｎｅｗｉｌｔｄｉｓｅａｓｅ（ＰＷＤ）ｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｅｐｉｎｅｗｏｏｄｎｅｍａｔｏｄｅ（ＰＷＮ），Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ，ｉｓ ｂｅｌｉｅｖｅｄｔｏｂｅｔｈｅｍｏｓｔｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｏｆｐｉｎｅｓｐｅｃｉｅｓ，ｃａｕｓｉｎｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｃｏｎｏｍｉｃａｎｄｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｏｓｓｅｓａｒｏｕｎｄ ｔｈｅｗｏｒｌｄ．Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ（ＣａＭ）ｉｓａｍａｊｏｒｃａｌｃｉｕｍｂｉｎｄｉｎｇｍｅｓｓｅｎｇｅｒｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌｓ．Ａ ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＣａＭｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍＭａｓｓｏｎｐｉｎｅ（Ｐ．ｍａｓｓｏｎｉａｎａ）ｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴＰＣ