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人体解剖与组织胚胎学专业毕业论文 [精品论文] 自体动员和移植骨髓干细胞治疗肝损伤疗效比较的研究 关键词：骨髓干细胞 自体动员 干细胞移植 肝损伤 动物模型 摘要：目的：本实验分别通过注射粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞和门静脉移植体外增殖纯化的骨髓干细胞治疗大鼠的肝脏损伤，并作疗效的比较。 方法：通过贴壁筛选结合消化控制，从大鼠骨髓中分离、纯化扩增大鼠BMSCs，观察大鼠BMSCs的形态、采用免疫荧光技术检测阳性标记CD44和阴性标记CD34，鉴定纯化的BMSCs。采用大鼠腹腔注射40％（v/v）四氯化碳的植物油溶液，1ml/kg，每周注射两次，连续4周建立肝损伤模型。通过检测大鼠血浆ALT、AST，肝脏病理检查确认造模成功，造模成功后分别进行G-CSF自体干细胞动员和体外增殖骨髓间充质干细胞进行体内移植治疗，通过观察损伤肝脏的病理改变、血生化改变比较两种治疗技术对肝损伤恢复的效果。为了防止大鼠肝脏损伤后白发性恢复，本实验采用治疗后继续注射四氯化碳。为了追踪移植的干细胞是否进入肝脏，在BMSCs移植前对所移植的细胞进行标记，为防止出现假阴性结果，采用了DAPI与BrdU两种标记方式对所移植的干细胞进行标记。采用血细胞计数盘法计算外周血有核细胞数来反映自体于细胞动员情况。 结果：分离纯化的大鼠BMSCs呈梭形、多角形等成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。大鼠BMSCs CD34表达阴性；CD44表达阳性，表明细胞纯化较好。注射40％CCl44周后，检查肝脏组织病理改变：实验组再生肝细胞增多，坏死局部的网状纤维融合形成胶原纤维，初期增生的纤维组织形成小的条索但未改建肝小叶，血浆生化指标ALT、AST升高，说明肝损伤模型建造是成功的。分别给予白体干细胞动员和移植骨髓间充质干细胞进行干预治疗。治疗3周动物一般情况明显改善，动物毛色光亮，体重增加，肝脏病理变化减轻。血浆ALT、AST降低，但均未恢复至正常。干细胞移植的肝组织中观测到标记的BMSCs，说明移植的干细胞归巢到肝脏，干细胞白体动员鼠外周血有核细胞数明显增加，说明粒细胞集落刺激因子将干细胞动员到外周血。结果表明：干细胞移植和干细胞动员均能降低血浆ALT、AST但移植纽治疗效果较干细胞动员组治疗效果更好。肝脏病理检查结果也进一步证实移植治疗组的肝脏组织结构较动员组明显得到恢复。 结论：1.G-CSF白体干细胞动员和异体干细胞体外纯化、扩增进行体内移植均能改善慢性肝损伤的组织结构和肝功能，并且干细胞移植改善肝组织结构和肝功能的效果更好。2.将普通注射器改造为移植用注射器，提高了干细胞经大鼠门静脉移植的成功率，减少了手术副损伤。3.Brdu和DAPI两种标记方法标记率没有明显差异，但是Brdu更方便。  正文内容 目的：本实验分别通过注射粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞和门静脉移植体外增殖纯化的骨髓干细胞治疗大鼠的肝脏损伤，并作疗效的比较。 方法：通过贴壁筛选结合消化控制，从大鼠骨髓中分离、纯化扩增大鼠BMSCs，观察大鼠BMSCs的形态、采用免疫荧光技术检测阳性标记CD44和阴性标记CD34，鉴定纯化的BMSCs。采用大鼠腹腔注射40％（v/v）四氯化碳的植物油溶液，1ml/kg，每周注射两次，连续4周建立肝损伤模型。通过检测大鼠血浆ALT、AST，肝脏病理检查确认造模成功，造模成功后分别进行G-CSF自体干细胞动员和体外增殖骨髓间充质干细胞进行体内移植治疗，通过观察损伤肝脏的病理改变、血生化改变比较两种治疗技术对肝损伤恢复的效果。为了防止大鼠肝脏损伤后白发性恢复，本实验采用治疗后继续注射四氯化碳。为了追踪移植的干细胞是否进入肝脏，在BMSCs移植前对所移植的细胞进行标记，为防止出现假阴性结果，采用了DAPI与BrdU两种标记方式对所移植的干细胞进行标记。采用血细胞计数盘法计算外周血有核细胞数来反映自体于细胞动员情况。 结果：分离纯化的大鼠BMSCs呈梭形、多角形等成纤维细胞样形态，大小均一，漩涡状生长。大鼠BMSCs CD34表达阴性；CD44表达阳性，表明细胞纯化较好。注射40％CCl44周后，检查肝脏组织病理改变：实验组再生肝细胞增多，坏死局部的网状纤维融合形成胶原纤维，初期增生的纤维组织形成小的条索但未改建肝小叶，血浆生化指标ALT、AST升高，说明肝损伤模型建造是成功的。分别给予白体干细胞动员和移植骨髓间充质干细胞进行干预治疗。治疗3周动物一般情况明显改善，动物毛色光亮，体重增加，肝脏病理变化减轻。血浆ALT、AST降低，但均未恢复至正常。干细胞移植的肝组织中观测到标记的BMSCs，说明移植的干细胞归巢到肝脏，干细胞白体动员鼠外周血有核细胞数明显增加，说明粒细胞集落刺激因子将干细胞动员到外周血。结果表明：干细胞移植和干细胞动