血质委血站核酸扩增检测讨论议题-修改.pptVIP

血站核酸扩增检测讨论议题 背 景 全国血站系统血液安全形势 3600吨血液 2吨血液因HIV初筛（+）报废 1490人份确认HIV（+） 61个城市18101名男男同性恋流行病学调查 HIV（+）平均4.9% 最高10.0% 浙江、甘肃、天津、四川相继发生了4例窗口期感染HIV的事件 自2002年以来，临床用血量平均每年增加10% 开展核酸检测的目的 通过在全国开展血液相关病毒核酸检测，提高血液质量，保障临床用血安全。 议题一：标本的采集、运输和保存 标本的采集、运输和保存（增） 标本采集 采血管的选择---无菌真空采血管 血清管 普通血清管 带分离胶血清管 抗凝管 EDTAK2或EDTAK3抗凝管 EDTAK2或EDTAK3抗凝分离胶管 枸橼酸钠等抗凝管 采集方式 理想：旁路系统 不理想：“小辫”（导管）留样（若采取则第一管酶免 第二管核酸） 标本的采集、运输和保存 标本留取的数目和种类： 1、数目：2、3、4 2管：NAT、酶免生化血型 3管：NAT、酶免生化、血型 4管：NAT、酶免生化、血型、存档标本 2、种类 NAT管必须用无菌、分离胶 第一种模式酶免生化血型管必须用无分离胶抗凝管 第二种模式酶免生化用血清管，血型管必用抗凝无分离胶管 存档标本与NAT管一样 注意：如果只留一种存档标本，只能选用NAT管！ 标本的采集、运输和保存 标本留样顺序 标本采集后保存 温度：室温 时间：4小时内离心（理想状态）（采集后半小时） 离心条件：800—1600g 20分钟 标本运输 温度：2-8℃ 时间：48小时内（离心后至检测前2-8℃保存不超过48小时） 用分离胶有利于运输 标本的采集、运输和保存 标本长期保存 理论：2~8℃不超过48小时，3个月内-20℃，3个月以上-70℃， 保存管的密闭程度 保存方式： 单独留存档标本：优缺点 检后标本的原管存档：优缺点 深孔板留样（必须经灭菌处理，密闭性好）优缺点 试管保存的占用资源的问题 议题二：实验室防污染措施 污染源 主要的污染源 标本之间产生的气溶胶（前污染） 操作人员（前污染） 手 衣服 扩增产物（后污染） 实验室的设置原则 “十六字原则” 各区独立（试剂准备区、标本制备区、扩增分析区） 注意风向 因地制宜 方便工作 “区域”的划分 各区独立 试剂准备区 标本制备区 扩增区 产物分析区 不合理的实验室 控制“风向”是关键 注意风向 原则：“脏”的风不能进入“干净”的区域 使空气按试剂准备区→标本制备区→扩增（产物分析）区的方向流动 正压、负压设施 排风扇 功率 数量 合理的实验室 合理的实验室 “区域”的合并 如使用扩增和产物分析同时完成的实时荧光PCR仪进行核酸扩增检测，扩增区和产物分析区可以合并。 如使用核酸提取、扩增及产物分析等均在一台仪器上完成的全自动核酸检测分析仪，标本制备区、扩增区和产物分析区和合并。 PCR实验室防污染要点 建立无“基因”或“核酸”概念非常重要，类似无菌概念 各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的直接相通 实验室保持合理的通风 对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；其他物品不得混用（例如：笔、纸张） 空气流向：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区 试剂阳性对照和内对照储存在标本制备区 使用带滤芯的吸头 PCR实验室防污染要点 使用外排式的生物安全柜(30%外排) 自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废弃 生物安全柜不应放在人员走动频率较高的地方，也不应直对空调的通风口 使用次氯酸钠溶液消毒（实验台面、地面，不能用于设备） 使用1mol/L的HCL溶液（吸头） 使用紫外线照射（空气） 75%乙醇溶液（空气喷雾） 实验室污染后处置 实验室污染后，如何处理？ 通风 次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用） HCL溶液（吸头） 紫外线（固定、移动） 酒精喷洒（空气） 是否有备用实验室？（举例：有一实验室污染后，处理3个月无效，最后，实验室搬迁。） 议题三：核酸检测的质量控制 核酸检测质量控制 核酸检测系统确认 灵敏度（检测下限：FDA要求HCV HIV单份标本≤5000IU/ML，系统≤ 100IU/ML。系统乙肝95%LOD为6.3IU/ML,HCV为23.3IU/ML HIV-1 47.6IU/ML。罗氏的乙肝3.3IU/ML，HCV10.7IU/ML,HIV-1 49IU/ML;诺华乙肝11IU/ML，HCV4.6IU/ML,HIV-1 26IU/ML） 精密度（批内、批间） 特异性 混合样本结果与拆分样本结果是否一致 日常样本检测通量 核酸检测系统的对照 内对照 阳性