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免疫学实验（凝集与沉淀反应） * 实验内容 一、凝集反应 1、玻片凝集试验（直接凝集反应 ） 原理： 颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与其相应的抗体，在 有适量电解质的环境中，两者直接特异性结合，进一步凝集 成肉眼可见的凝集块，称为直接凝集反应。为定性实验，用 已知抗体检测未知抗原。 材料： 痢疾杆菌诊断血清和伤寒杆菌诊断血清，生理盐水，待检细菌，载玻片，牙签。 方法： （1）取洁净载玻片一张，用红腊笔画分三格并标明次序。 （2）分别取痢疾杆菌诊断血清、伤寒杆菌诊断血清及生理盐水各一滴，分别滴加于载玻片所画出的三个格内。 （3）取待检细菌，于三格内各加一滴。 （4）用牙签搅匀。注意每混匀一格必须更换牙签，否则将会 出现交叉凝集，影响实验结果。 （5）将玻片轻轻摇动1-2分钟，观察结果并记录报告。 结果判断： 定性测定，出现凝集为阳性，不出现凝集为阴性。 2、间接凝集反应 原理： 用可溶性抗原（或抗体）包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体（或抗原）结合，在一定电解质条件下，出现肉眼可见的凝集块，称为间接凝集反应。 材料： 类风湿乳胶诊断试剂，阳性对照，阴性对照，待检血清，载玻片等。 方法：（1）取洁净载玻片一张，用红腊笔画三格并标明次序。 （2）分别取阳性对照血清、待检血清、阴性对照各一滴，分别滴加于载片所画的三个格内。 （3）再加致敏乳胶每格各一滴，用牙签搅匀。注意换牙签。 （4）将玻片轻轻摇动2-3分钟，观察结果并记录报告。 结果判断： 一般作定性测定，以肉眼观察出现凝集为阳性，不出现 凝集为阴性。 二、沉淀反应（对流免疫电泳） 基本原理: 带电的胶体颗粒可在电场中移动,其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。抗原在pH8.6的缓冲液中带负电荷,将抗原加于琼脂板阴极端的小孔中,由阴极向阳极移动;抗体是球蛋白,等电点较高,只带微弱的负电荷,而且分子较大,故移动较慢,将抗体加于阳极端的小孔中,因电渗作用而流向阴极;当抗原与抗体在两孔间相遇时,在两者比例适当处形成白色沉淀线。此种在双向琼脂扩散基础上加电泳的方法,称为对流免疫电泳。常用于检测甲胎蛋白及乙型肝炎表面抗原。 实验方法: 1.加样：于抗体孔内加入甲胎蛋白诊断血清，于抗原孔内分别加入待检血清及甲胎蛋白阳性血清。 2.电泳：将加好样的琼脂板置于电泳槽支架上，抗原端靠近阴极，抗体端靠近阳极，琼脂板两端用四层纱布搭桥，使琼脂板两端与电泳槽缓冲液相连，槽内缓冲液为PH8.6 0.05M巴比妥缓冲液。接通电源, 80-100V稳压电泳20min-40min，直至出现明显沉淀线。 结果观察: Ag Ab - + 琼脂对流免疫电泳试验结果 *