梨茎尖组织培养与再生体系的建立.docVIP

安 徽 农 业 大 学 大学生科技创新基金项目 申 请 书 项目名称: 砀山酥梨茎尖离体培养与叶片再生体系的建立 申 请 者： 吴湘琴 所在单位： 园艺学院08园艺二班 联系电话： 申请日期： 2010年5月19日 安 徽 农 业 大 学 教 务 处 二零零九年印制 简表 项目名称 砀山酥梨茎尖离体培养与再生体系的建立 项目类别 专业性研究 申请金额 1500 经费类别 ①校资助 （①校资助②学院教师资助③自筹） 起止年月 2010.6-2011.5 申请者 姓名 吴湘琴 性别 女 出生年月 1990年4月 专业 园艺 年级 08级 联系电话 项目组成员 姓名 年龄 专业·年级 项目中的分工 签名 孙学睿 21 设施08级 茎尖的取样、初代培养及增殖培养 贾云生 21 园艺08级 茎尖的生根培养及叶片再生实验 研究内容和意义摘要 本 研 究 以 砀 山 酥 梨 的 茎 段 为 外 植 体 探 讨 3 种 培 养 基 对 砀 山 酥 梨 组 织 苗 增 殖 的 影 响 。 并 以 砀 山 酥 梨 的 无 菌 叶 片 为 试 材 探 讨 不 同 激 素 配 方 对 叶 片 再 生 的 影 响 。 研 究 结 果 将 对 砀 山 酥 梨 的 产 量 和 水 果 品 质 具 有 一 定 的 理 论 价 值 与 商 业 前 景 。 主题词 砀山酥梨 组织培养 叶片再生 立论（包括项目的研究意义及国内外现状分析） （一）梨离体培养的影响因素 不同外植体材料的取材时期及接种时期影响梨外植体的成活。其最佳取材时期，根据外植体材料的不同而有差异。茎段、茎尖取材接种时期为3～5月份，茎尖此时取材存活率为 60％ 以上，5月份以后取材，茎尖存活率低。外植体消毒所用的消毒剂种类及消毒时间的长短对外植体存活率都有明显影响。消毒时间过长，对细胞的毒害作用越大，从而影响细胞活性，可能还会引起外植体褐变从而降低存活率；消毒时间过短，则达不到灭菌的目的。在梨的离体培养中，培养基的种类有固体培养基和液体培养基两种，Daminao[49]等研究发现，梨品种 “Precoce di fiorano” 在固体培养基上生长最好，而 “harvest queen” 在液体培养基上生长比较好。不同梨品种对培养基的要求有差异，因此认为采用哪种培养基，要根据培养品种而决定。在多数情况下，梨的离体培养以固体培养基为主，其中MS培养基的通用性较强，得到广泛使用。在梨离体培养中，芽的分化、繁殖速度的快慢以及生长状态，除与培养基种类有关外，还与外源激素的种类、浓度及各种激素间的浓度比有很大关系。常用的植物调节剂主要6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、赤霉素(GA3)、奈乙酸(NAA)等。 （二）梨离体培养目前存在的问题 近年来，随着生物技术的不断发展，我国梨果生产正朝着良种化、基地化、密植矮化、优质化等方向发展，但在生产中仍存在着许多亟待解决的问题，如病虫害的控制、果实品质的提高等。这些问题我们可通过生产管理，更多的是靠培育新品种等途径来解决。目前，梨树离体培养技术在梨树基因工程和育种研究中的应用虽然取得很大进展，但在生产实际中应用还是比较少。其原因主要是，在梨树离体培养中方面，生根困难，不同品种生根率有差异；育苗成本比较高，这在很大程度上限制了试管苗的商品化生产；叶片培养中不定梢再生率普遍偏低。在梨遗传转化方面，虽然已取得了成功，但由于受基因型、抗生素种类和浓度、农杆菌侵染能力等因素的影响，遗传转化率还比较低[32，33，34]。 目前梨树的组织培养技术已经应用到保存种质资源、快繁、培育无毒苗，及遗传转化等许多领域。我国在梨树组织培养研究和应用方面也取得了一定的成绩。利用组培快繁可以充分体现出其优越性；对于感染病毒的栽培植物、茎尖组织培养脱毒技术能够恢复品种优良特性，给生产带来可观的经济效益[6，35，36]。但是从总体上看发展依然不均衡，应用水平和经济效益也不是太高，不能满足作物生产水平迅速发展对新技术的要求，所以急待更广泛的宣传普及植物组织培养应用技术，以满足实际需要。 （三）本项目研究的意义 总的来说，梨的组织培养技术仍存在繁殖系数低、叶片再生频率低，而且结果不稳定，这与转基因操作所需的高效、稳定的再生体系仍有很大差距。并且培养成功的报道大多集中在西洋梨上，而西洋梨与日本砂梨、中国白梨及砂梨之间遗传背景差异很大，所以从培养条