第七章——siRNA与miRNA介导的调控.pptVIP

第七章 siRNA与miRNA介导的调控 Traditional RNAs 非编码RNA Ribosomal RNA (rRNA) Transfer RNA (tRNA) Small nuclear RNA (snRNA) Small nucleolar RNA (snoRNA) Interference RNA (RNAi) Short interfering RNA (siRNA) MicroRNA (miRNA) RNAi的研究历程 内容纲要 一、RNA干扰及其机制 二、MicroRNAs在发育中的调控作用 三、RNAi与异染色质 四、miRNA 在癌症发生中的作用 五、siRNA的应用 一、RNA干扰及其机制 1. RNA干扰：生物体内通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导具有特异性序列的基因沉默的过程 2. 转录后沉默：Post-transcriptional gene silencing, PTGS 3. 表观遗传学中的一种重要现象 1. 1995年，Su Guo and Kenneth J. Kemphues，线虫 2. 利用反义RNA技术阻断线虫中的par-1基因。在对照实验中给线虫注射正义RNA以期观察到基因表达的增强。 3. 然而，正义RNA和反义RNA都能够有效地抑制基因的表达！ 4. 沉默的效应能够在被注射的动物及其后代中保持，虽然RNA转录本在胚胎早期就发生降解 双链RNA抑制与其序列同源的基因的表达 RNA 干涉的概念 双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）导入细胞后，引起细胞内特定的mRNA降解，从而导致基因沉默，并使生物体产生相应的功能缺陷型，这种由dsRNA介导的基因沉默现象称为RNA干涉（RNAi） RNAi的普遍性 RNA干扰是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象，是生物界一种古老而且进化上高度保守的基因表达调节机制。 siRNA的概念 siRNA具有独特的双链结构，长21-23nt的小片段分子。序列与所作用的靶mRNA的序列具有同源性，双链的两端各有2个突出非配对的3′碱基，两条单链末端——5′端磷酸和3′端羟基，这是细胞赖以区分真正的siRNA和其他dsRNA的结构基础。 siRNA siRNA是如何产生的 siRNA是如何发挥效用的 They guide the degradation of target mRNA siRNA是如何发挥效用的 1. 从双链RNA产生的小干扰RNA可以用不同机制关闭基因的细胞机器 2. 为什么外源的dsRNA能够抑制与其序列同源的基因的表达？ A. Postinitiation mechanisms. miRNA通过阻碍翻译的延伸，或者促使核糖体与mRNA分离来抑制mRNA的翻译 B. Cotranslational protein degradation. 在多肽链翻译后的同时使其降解 C. Argonaute与eIF4E竞争结合cap D. Argonaute招募eIF6，从而阻止大的核糖体亚基与小亚基的结合 E. Argonaute通过脱腺苷化 (deadenylation) 阻止loop mRNA的形成 F. MicroRNA-mediated mRNA decay. miRNA触发脱腺苷化并使得底物mRNA decapping Dicer 1. PAZ有一个OB折叠，与ssRNAs的3’端有较弱的亲和力，允许PAZ与dsRNAs露在外面的两个核苷酸结合 2. Dicer的PAZ结构域能够识别Drosha切割的产物末端 1. dsRNA首先需要被Dicer相关的复合物进行处理，然后在Argonaute相关的复合物的引导下发挥功能； 2. Dicer和Argonaute家族的成员在RNA诱导的沉默通路中发挥功能，不同的组成通过不同的机制引起沉默 3. 例如，不同的Argonaute相关复合物能够引起不同的沉默过程 (mRNA降解 vs. 翻译抑制) 1. MicroRNA (miRNA): 一种非编码小的RNA (~21–23 bp)，通过Dicer剪切其前体RNA (~70-90 )所得 2. miRNA以RNA-蛋白质复合物的形式，在动物和植物的细胞中广泛的表达，也称为miRISCs 3. 在发育的过程中起着关键性的作用，能够促使与miRNA序列同源的靶基因的mRNA的降解或者翻译的抑制 真核生物中Micro RNA的分类 miRNAs vs. siRNA：不同 miRNAs vs. siRNA：相似 miRNA gene discovery 1. Forward genetics: lin-4 let-7 2. Reverse genetics: miR-181, mir-273 lsy-6