分泌睫状神经营养因子腺病毒载体的构建及小量复制病毒增强其分泌表达.pdfVIP

808 · · 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.5 MAR.2011 分泌睫状神经营养因子腺病毒载体的构建及小量复制病毒增强其分泌表 达的研究* 李惠明 裘 玮 王 丰 韦 芳 张巨峰 陈霞芳 黄 倩△ (上海交通大学附属第一人民医院中心实验室 上海200080) 摘要目的：探讨复制型腺病毒能否增强增殖缺陷型腺病毒Ad5-hCNTF 所携带外源基因的表达分泌。方法：亚克隆获得分泌型睫 ciliary neurotrophic factor , pshuttle pshuttle-hCNTF pme1 ,CIAP 状神经营养因子的基因（ ）然后将此基因插入到穿梭质粒 。 经 酶切后 去磷酸化，利用Ad-EASY 腺病毒制备系统，将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 共同转化大肠杆菌BJ5183 ，通过同源重组，筛选出 AD-293 5 含目的基因的重组型腺病毒质粒的菌株，获得大量该质粒后转染病毒包装细胞 ，成功包装出一种血清 型增殖缺陷型腺 Ad5-hCNTF PCR Western blotting CNTF 病毒 。结果：经 鉴定该病毒含有该基因片断， 证实该病毒感染细胞后能表达 蛋白。采用 ELISA 法检测培养液证实感染细胞能高水平地分泌CNTF。结论：体外实验表明在不同滴度的复制型腺病毒Ad5-E1+E3+ 的带动 Ad 下，该病毒感染细胞后分泌表达目的蛋白的水平显著提高，为今后应用 作为基因治疗的载体提供实验证据。 关键词：腺病毒；睫状神经营养因子；基因；分泌表达 Q75 Q78 R373 A 1673-6273(2011)05-808-04 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： Construction of Adenovirus Vector of Secretory Ciliary Neurotrophic Factor and Increasing of Its Secretion by Replicative Adenovirus* LI Hui-Ming, QIU Wei, WANG Feng, WEI Fang, ZHANG Ju -Feng, CHEN Xia-Fang, HUANG Qian△ (Central Laboratory, The First Peop le s Hosp ital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200080, China) ABSTRACT Obj ective: We investigate whether replication-competent adenovirus Ad5 (E1+E3+) could enhance the expression of hCNTF secreted by celllines after replication-defective adenovirus Ad5-hCNTF infection in vitro. Metho