光you导高铁肌红蛋白还原的光谱法.pdfVIP

2011 年第 69 卷 化 学 学 报 Vol. 69, 2011 第 13 期, 1559～1564 ACTA CHIMICA SINICA No. 13, 1559～1564 ·研究论文· 光诱导高铁肌红蛋白还原的光谱法研究 周华伟a 曹洪玉a 唐 乾a 安良梅a 郑学仿*,a,b (a 大连大学生物工程学院 大连 116622) (b 辽宁省生物有机化学重点实验室 大连大学 大连 116622) 摘要 采用紫外-可见吸收、荧光及圆二色(CD)等光谱法为主要分析手段, 对光诱导高铁肌红蛋白(metmyoglobin, metMb)还原及其引起的蛋白结构变化进行了研究. 采用氙灯 430 nm 的单色光和紫外灯对高铁肌红蛋白溶液进行光照 实验, 实验结果显示, 在 metMb 的 Q 吸收带 545 nm 和 580 nm 附近吸收峰强度显著增强. 通过验证性实验, 证明光照 后 metMb 发生了还原反应. 验证性实验包括: metMb 中加入还原剂连二亚硫酸钠实验; 光照后样品加入氧化剂铁氰化 钾的可逆性实验; 光照的同时通入 CO 实验. 进一步讨论表明, 采用氙灯 430 nm 的单色光诱导metMb 还原的机理为光 诱导的分子内电子转移. 此外, 对光还原反应后的样品进行同步荧光和 CD 光谱分析, 发现蛋白质色氨酸残基微环境极 性增加, α-螺旋的含量由 63%下降到 57%, 而β-折叠的含量增加了 7%. 关键词 高铁肌红蛋白; 光还原; 激发态; 结构变化 Spectral Study on the Photoreduction of Metmyoglobin Zhou, Huaweia Cao, Hongyua Tang, Qiana An, Liangmeia Zheng, Xuefang*,a,b a ( College of Bioengineering, Dalian University, Dalian 116622) b ( Liaoning Key Laboratory of Bio-organic Chemistry, Dalian University, Dalian 116622) Abstract The photoreduction of metmyoglobin (metMb) and its effects on the changes of protein structure were investigated by UV-visible absorbance, fluorescence and circular dichroism (CD) spectra. MetMb in Na HPO -NaH PO buffer were irradiated with xenon lamp at 430 nm and ultraviolet lamp. The results in-