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长牡蛎中天然牛磺酸的提取辉1，管华诗1，赵志强2张（1.中国海洋大学，海洋药物与食品研究所，山东青岛266003；2.国家海洋药物工程技术研究中心，山东青岛266061）摘要：以长牡蛎(Crassostreagigas)为研究对象，探讨并优化了从牡蛎中提取和制备牛磺酸的工艺。牛磺酸纯度采用TLC进行分析，其结构进一步用红外光谱（IR）和核磁共振波谱（NMR）进行了确证。结果表明，长牡蛎富含牛磺酸，在60℃水溶液中提取率（0.8％，湿质量）较高，为天然牛磺酸开发提供了参考数据。关键词：长牡蛎（Crassostreagigas）;牛磺酸;提取中图分类号：Q58文献标识码：A文章编号：1000-3096(2005)04-0001-04牛磺酸（Taurine）又称为2-氨基乙磺酸，是人体必需的重要氨基酸之一，具有独特的药理及营养保健作用，在哺乳动物心脏、骨骼肌肉、肾、脑等组织中可以游离存在。牛磺酸被认为是婴儿的必须营养素，引起了各界的广泛关注和极大兴趣，引发了对其研究和开发的热潮[1]。牛磺酸是氧化损伤的保护剂[2]，能清除氧自由基、抑制脂质过氧化、维持细胞渗透压、稳定细胞膜、调节细胞钙稳定，同时还作为中枢性神经递质调节中枢神经系统等，在心血管系统中有抗心律失常、心肌保护和降低血压等作用[3]。最新研究发现，牛磺酸在保护缺血脑细胞，预防白内障，降低血糖水平，降血脂，降血压，防止动脉粥样硬化以及预防老年疾病方面也起到了重要的作用。在牛磺酸资源研究方面，国内外主要依靠化学合成，但存在原料毒性大和环境污染等严重问题。因此，寻找安全的牛磺酸资源十分必要。牛磺酸广泛存在于除植物外的许多生物体内，尤其在水产品中含量丰富，且以游离形式存在，如：青花鱼、墨鱼、章鱼、牡蛎、蛤蜊、虾等。从海产品中提取牛磺酸工艺简单而无污染，并且利用水产品的下脚料提取牛磺酸又具有环保意义，具有很好的前景。国内在天然牛磺酸提取研究方面的文章不多[4]，有人从章鱼和密鳞牡蛎中探索提取天然的牛磺酸。作者以长牡蛎为原料，探讨并优化了从牡蛎中提取牛磺酸的工艺，为大规模提取牛磺酸提供了基础数据。1材料与方法1.1实验材料长牡蛎（Crassostreagigas），秋冬季购于青岛李村水产品市场；茚三酮（上海三爱思试剂有限公司）；牛磺酸（Sigma公司）；羧甲基纤维素钠（中国医药集团上海化学试剂公司）；Na+型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂[001×7(732)]；XWT-S小型台式记录仪（上海自动化仪表厂）；DDS-11A电导仪（上海康仪仪器有限公司）；BS-100A自动部份收集器（上海青浦沪西仪器厂）；HD-9704紫外检测仪（上海精科实业有限公司）；HL-2恒流泵（上海精科实业有限公司）；X-4数字显示显微熔点测定仪（北京泰克仪收稿日期：2004–11–12；修回日期：2005–01–06作者简介：张辉（1981–），女，山东东营人，硕士，主要从事生物化学研究，电话：0532–2031790，E–mail:zhanghui8218@ouc.edu.cnMarineSciences/Vol.29,No.4/20051器有限公司）；紫外分光光度计（UV-2501PC）;DHG-9030型电热恒温鼓风干燥器（上海一恒科技有限公司、上海益恒实验仪器有限公司）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；傅立叶变换红外光谱仪（NicoletNexus470型，Thermo；超导核磁共振波谱仪(JeolJNM-ECP600M，日本电子)。1.2实验方法1.2.1牛磺酸提取参照文献[5]，采用水煮法抽提。1.2.2牛磺酸的纯化用强酸性阳离子交换树脂对抽提物除蛋白并进行分离纯化。样品浓度为12g/L，pH为3.0，以蒸馏水作洗脱溶液，根据电导率和pH变化曲线，以及采用2，4二硝基氟苯和牛磺酸产生衍生物具有紫外吸收特性对牛磺酸进行检测，收集含有牛磺酸的部分。1.2.3牛磺酸熔点的测定按常规方法测定[6]。取少量制备到的牛磺酸晶体，置载玻片中央，盖上盖玻片，小心压碎。放到X-4数字显示显微熔点测定仪上，调节加热温度，观察晶体变化，得熔点的熔解温度范围。1.2.4牛磺酸的TLC分析图1太平洋牡蛎中牛磺酸的提取工艺流程Fig1.FlowchartoftaurineextractionfromCrassostreagigas固定相为硅胶G板（4‰CMC-Na:硅胶G为3:1）；流动相为正丁醇:乙酸:乙醇:水（体积比4:2:1:1）；显色剂为茚三酮0.1%乙醇溶液。1.2.5牛磺酸的IR分析参照文献[7]的方法，取1mg样品溴化钾压片进行分析。1.2.6牛磺酸NMR分析参照文献[8]的方法，样品用重水交换2次，溶解后加入核磁管测定。因此需要对样品进一步分离纯化。牛磺酸结构特殊，分子中带有一磺酸基和β位氨基，不易在树脂上交换，其提