COX2在宫颈鳞状细胞癌和宫颈上皮内瘤变中的.docVIP

精品论文 参考文献 COX2在宫颈鳞状细胞癌和宫颈上皮内瘤变中的 李芳1张飞燕1王帅2何芳3 　　1保定市第二医院病理科河北保定071000； 　　2保定市第二医院检验科河北保定071000； 　　3保定市第二医院病案科河北保定071000 　　【关键词】COX2；HPV16；宫颈上皮内瘤变；宫颈鳞状细胞癌 　　【中图分类号】R71174 　　【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12007701 　　宫颈鳞状细胞癌一种较为常见的女性恶性肿瘤,常见于女性生殖道，其发生发展通常是由多种因素导致。环氧合酶2(cyclooxygenase2,COX2)在多种肿瘤细胞和肿瘤组织中都普遍过表达，是一种典型的限速酶，主要作用为催化前列腺素的合成。Masferrer［1］等发现，COX2高表达通常是癌症发生的早期事件。目前研究结果表明，人类乳头瘤状病毒（human papilloma virus,HPV）感染是宫颈鳞状细胞癌发生主要的高危因素［2］，尤其是HPV16/18［3］。COX2在宫颈鳞状细胞癌和宫颈上皮内瘤变中的表达如何，其高表达是否与已知致癌因素人乳头状瘤病毒(HPV)感染有关，目前报道较少。我们采用免疫组织化学和原位杂交方法检测正常官颈鳞状上皮、宫颈低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌组织中COX2蛋白表达和HPVl6DNA感染状况，对于COX2在宫颈鳞状细胞癌和宫颈上皮内瘤变中的表达及与HPV16感染的关系进行探讨。 　　1材料与方法 　　11材料：选取2009—2012年保定市第二医院医院病理科所保存的131例石蜡包埋标本。其中，42例为宫颈鳞状细胞癌组织，50例为高级别上皮内瘤变，22例为宫颈低级别上皮内瘤变。同时，选取17例非肿瘤患者的正常宫颈鳞状上皮为对照组。标本经4％中性甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度4mu;m。 　　12免疫组织化学：采用EliVisionTM plus两步法。采用福州迈新试剂公司生产的即用型兔抗人COX2单克隆抗体、EliVisionTM plus检测试剂盒及DAB显色试剂盒。采用TrisEDTA缓冲液(pH 90)修复液进行高温高压法抗原修复。将微波盒内注入缓冲液，放入切片并且浸没，中高火加热至喷气后保持90s，结束后室温冷却。染色步骤参照试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照。 　　13原位杂交：采用福建泰普生物科技有限公司生产的HPVl6原位杂交检测试剂盒。主要步骤：切片经烤片后脱蜡；微波加热脱水干燥；每张切片滴加25mu;l地高辛标记HPVl6探针，并加盖玻片；95℃变性8 min于37℃湿盒(含杂交增强液)中孵育过夜(lt;16 h)；加50mu;l抗地高辛抗体，37℃湿盒中孵育30 min后加二抗；DAB显色；苏木精对比染色，中性树胶封片。 　　14结果判断：由两位病理专家评估染色结果。COX2免疫组织化学染色结果以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性。染色结果参照Kim YB［4］等的方法，根据染色强度和胞浆阳性细胞百分比，进行半定量的综合计分，分为2组（－，＋）。即：染色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，深褐色计3分；观察整张切片计数阳性细胞百分比的平均数，无阳性细胞计0分，le;25%计1分，26～50%计2分，51～75%计3分，ge;75%计4分。最后，将着色强度和阳性细胞百分比两者的计分相加，0～2分为阴性（－），ge;3分为阳性（＋）。 　　15统计学处理：采用SPSS 140统计软件，两样本率的比较用x2检验或Fisher确切概率法，两者相关性用非参数Spearman等级相关分析。 　　2结果 　　21COX2的表达：见表1。COX2在17例正常宫颈鳞状上皮中为阴性表达，在宫颈低级别上皮内瘤变中的阳性表达率为909％(2／20)，组间差异无统计学意义(Pgt;0．05)。在高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组中阳性表达率分别为48％(24／50)和5714％(24／42)，均明显高于宫颈低级别上皮内瘤变(x2=10025，x2=13820；Plt;005)。高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌两组之间阳性表达率差异无统计学意义(Pgt;005)。 　　22HPVl6DNA的表达：见表2。HPVl6DNA在宫颈鳞状细胞癌、高级别上皮内瘤变、宫颈低级别上皮内瘤变、正常宫颈鳞状上皮中，HPV l6DNA的阳性表达率分别为7857％(33／42)、6400％(34／50)、3636％(8／22)、1765％(3／17)。除正常宫颈上皮与低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌以外(分别为：x2=1659，x2 =1289；P