复方香菊冲剂微生物限度检查法的验证.docVIP

精品论文 参考文献 复方香菊冲剂微生物限度检查法的验证 （昆山市中医医院 江苏 昆山 215300） 【摘要】 验证所采用的方法适用于复方香菊冲剂的微生物限度检查，即确认复方香菊冲剂在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。以保证检验结结果的准确、可靠及检验方法的专属性。 【中图分类号】R286.0 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）01-0308-03 方法学验证： 1.供试品 复方香菊冲剂（规格：15g/袋，批号141212,150112,150302）生产供应单位：昆山市中医医院制剂室 2.培养基及试药 MUG培养基（批、靛基质试液（批由北京三药科技开发有限公司生产，中国药品生物制品检定所监制；营养肉汤培养基（批、玫瑰红钠琼脂培养基（批号、胆盐乳糖培养基（批号、营养琼脂培养基（批号；PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号；由上海博微生物科技有限公司生产。 3.仪器设备 双人净化工作台（型号：SW-CJ-IC、编号：424047）由苏净集团安泰公司生产；水浴锅（型号：GKC R214、编号：990422），由通州市泸通实验仪器厂生产；电热蒸气压力消毒器(型号：YX.400Z、编号：R305044)由上海三申医疗器械有限公司生产；TC-15套式恒温器(型号：TC-15)由浙江新华医疗器械厂生产。 4.菌种 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501(4代)、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003(5代)、大肠埃希菌CMCC(B)44102(5代)、白色念珠菌CMCC(F)98001(4代)、黑曲霉CMCC(F)98003(4代).由江苏省药品检验所提供。 5.实验依据 《中国药典》2010版一部（附录ⅩⅢC微生物限度检查法）。 6.实验操作 6.1 菌液制备方法 （1）取经33℃培养18～24h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜肉汤培养物1mL+9Ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至 10-5 -10-7，制成每1mL含菌数为50～100cfu的菌悬液。 （2）取经25℃培养18～24小时的白色念珠菌的新鲜培养物1mL+9mL0.9﹪无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6，制成每1mL含菌数为50～100cfu的菌悬液。 （3）接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养5～7天，加入3～5mL含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（mL/mL）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-6，制成每1mL含孢子数为50～100cfu的孢子悬液。 6.2 供试品溶液的制备 称取10g复方香菊冲剂加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲至100mL,混匀，作为1:10供试液。 6.3 菌落计数方法的验证（平皿法）： （1）试验组 a 取10个平皿，每2个一组分成5组，分别按大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的顺序进行标记。 b 取1:10的供试液1mL,分别注入10个平皿中，再依次加入上述5种菌的菌悬液1mL(50～100)cfu/mL),每种菌平行制备2个平皿，倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别至30～35℃培养3d和23～28℃培养5d。 （2）菌液组 分别取上述制备好的菌液1mL注入平皿内，每种菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。 (3) 供试品对照组 取1:10的供试液1mL分别注入4个平皿，立即倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置30～35℃培养3d和23～28℃培养5d。测定供试品本底菌数。 (4) 稀释剂对照组 本品未用特殊方法处理和制备（略）。 (5) 结果：见表1 (6) 评价：由表1可见：复方香菊冲剂用平皿菌落计数法3次独立的平行试验中5种菌株的回收率均高于70%，说明该方法用于细