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实验方法大全 建立一个良好的、具有示范意义的实验室规范是建立一个优秀实验室的最为基本的、必要的、关键的前题。 正文目录 正文目录 i 表格目录 ii 信息准备 1 基本鉴定神经活性因子所需项目 1 冰冻切片 1 cRNA探针标记 1 PCR Dig Probe Synthesis 2 Dig Easy Hyb杂交方案 2 原位分子杂交(ISH) 3 RACE实验方案 5 Northern Blot Dot Blot 6 Northern Blot杂交-mRNA膜杂交 6 随机引物标记DNA探针(试剂盒:Promega, U1100) 7 DNA纯化柱制作 8 RNA Master Blot放射性探针杂交检测 8 多组织Northern Blot放射性探针杂交检测 8 细菌培养 9 液体细菌培养 9 固体细菌培养 10 菌种的保存 10 感受态细胞的制备和保存 10 感受态细胞的制备 10 感受态细胞的冻存 11 质粒的提取和纯化 11 质粒DNA的小量提取和纯化 11 限制酶酶切反应 12 质粒的酶切，小量酶解反应 12 DNA的重组 12 T-载体连接(T/A cloning) 12 粘端连接法 13 平端连接法 14 平-粘端连接法(定向连接反应) 15 重组质粒的转化 15 重组质粒的鉴定 17 a-互补 17 插入失活 17 菌落原位杂交 18 限制酶酶切分析 19 琼脂糖凝胶电泳 19 从凝胶中回收DNA 19 PCR技术 20 细胞培养 21 无菌操作 21 试剂及材料 21 细胞的复苏 22 培养细胞换液 22 培养细胞的传代 23 细胞的冻存 23 细胞计数 23 细胞转染 24 转染质粒的制备 24 脂质体转染系统 24 新生大鼠皮层神经元分离与培养 24 Western Blot(Immunoblotting) 26 蛋白质样品的准备 26 细胞胞浆样品准备 26 细胞培养上清样品准备 26 细菌培养菌体蛋白样品准备 26 SDS凝胶电泳 26 SDS凝胶电泳 26 SDS凝胶的考马斯亮蓝染色 28 SDS凝胶的银染 29 SDS-聚丙烯酰胺凝胶的干燥 29 转膜 30 免疫反应 30 显 色 31 DAB显色 31 ECL显色 31 表格目录 表格 1、信息准备 1 表格 2、RNA探针标记体系 1 表格 3、PCR法Dig探针标记体系 2 表格 4、PCR法Dig探针反应参数 2 表格 5、抗体稀释液 3 表格 6、0.2mol/L NaH2PO4 3 表格 7、0.2mol/L Na2HPO4 3 表格 8、0.2mol/LPB(pH7.2)(Method I) 3 表格 9、0.2mol/LPB(pH7.2)(Method II) 3 表格 10、RACE之PCR反应体系 5 表格 11 6 表格 12 6 表格 13、随机引物标记DNA探针反应体系 7 表格 14、RNA Master Blot杂交检测反应体系 8 表格15、LB液体培养基 9 表格16、LB固体培养基 10 表格 17、0.1mol/L CaCl2溶液 11 表格 18、TE buffer配制方案 11 表格 19、双酶切反应体系 12 表格 20、pGEM?-T连接体系 13 表格 21、单次连接反应中PCR产物最低浓度要求 13 表格22、平端PCR产物加尾体系 13 表格 23 14 表格 24 14 表格 25 14 表格 26 15 表格 27、LB液体培养基配方 16 表格 28、LB固体培养基配方 16 表格 29、SOC培养基配方 16 表格 30、Mg2+ stock(2M) 16 表格 31 19 表格 32 20 表格33、0.25% Trypsin-0.04% EDTA消化液:500ml 22 表格34、细胞冻存液 23 表格35、DMEM培养基 24 表格 36、30%凝胶贮备液 26 表格 37、10%SDS 27 表格 38、5×电泳缓冲液 27 表格 39、10%过硫酸胺 27 表格 40、1.5mol/L Tris-Cl(pH8.8) 27 表格 41、1.0mol/L Tris-Cl 27 表格 42、2×Sample Buffer 27 表格 43、凝胶(分离胶)浓度的选择 27 表格 44、分离胶的制备 28 表格 45、配制Tris-甘氨酸SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳5%浓缩胶所用溶液 28 表格 46、脱色液 28 表格 46、考马斯亮蓝(Commassise blue R250)染液 29 表格 47、TBS配方(Western Blot用) 30 表格 48、TBST配方(Western Blot用) 31 表格 49、Blocking buffer配方(Western Blot用