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顺磁共振和傅里叶变换红外光谱法研究高温对荒漠苔藓质膜结构影响 第35卷 2007年3月 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 第3期 350—354 顺磁共振和傅里叶变换红外光谱法研究 高温对荒漠苔藓质膜结构影响 许书军王艳陈颖雯蔡伟民 (上海交通大学环境科学与T程学院,上海200240) 陈蔚红 (中国科学院上海有机化学研究所,上海200032) 摘要运用顺磁共振波谱和原位傅立叶变换显微红外光谱研究了高温对荒漠植物刺叶墙藓不同叶龄水合 组织质膜透性和膜蛋白二级结构的影响.自旋标记法研究质膜透性结果表明,处理前野生叶质膜透性普遍高 于室内培养获得的原丝体和次生叶,处理后次生叶膜透性变化最大,比处理前增加4倍,其次为原丝体.质膜 透性随叶龄增加,变化幅度逐渐降低.红外光谱的二阶求导,傅立叶白解卷积及拟合分峰等结果显示,各叶龄 间蛋白质二级结构含量差异较大,表明各龄组织蛋白成分不完全相同;高温处理后次生叶和原丝体O/螺旋含 量分别比对照增加40%和16%;其它叶龄组织二级结构含量变化范围小,表明热胁迫下老龄组织蛋白质二级 结构稳定.膜透性和膜蛋白二级结构分析证明,膜透性和蛋白质稳定性呈正相关,指示蛋白质组成和含量不 同是造成各龄组织不同耐热性的主要原因之一. 关键词质膜结构,耐热性,自旋标记,原位红外,刺叶墙藓 1引言 研究荒漠苔藓植物对逆境胁迫适应性,不仅有助于人工培育生物结皮保护生态环境,还可以利用苔 藓植物抗逆基因改良农作物.随着全球环境变化,我国西北地区气候正面临从干热到湿热型转变,而且 年平均温度以0.2℃增加….沙漠土壤表层间歇性高温对荒漠苔藓在沙漠地区分布产生选择压力,特 别是水合生长繁殖期间.水合组织在热胁迫超过40~C,组织遭受破坏,短时间(30rain以内)暴露于 42～51℃下将造成大部分苔藓死亡,主要由于高温造成细胞膜结构破坏,溶质渗漏导致细胞死亡_2.而 墙藓类能够在期间存活],热处理后不同叶龄叶片繁殖能力存在显着差异,其减少损伤和自我保护机 理尚不完全清楚. 利用生物化学方法研究苔藓质膜热胁迫响应存在诸多缺陷,而电子顺磁共振波谱(EPR)自旋 标记和傅立叶变换显微红外光谱(IRmicroscope)在研究逆境对生物膜组成和结构方面,比传统生理 生化方法具有更简单前处理和更高精确度J.FTrIR方法广泛应用于医学,用于植物组织膜结构 对环境胁迫响应是近几年国内外研究热点L】;EPR研究集中在干燥对种子和花粉质膜透性的影 响¨],应用于营养体高温胁迫研究尚未见报道.本研究选择古尔班通古特沙漠分布相对广泛的耐干 性苔藓刺叶墙藓(Tortuladesertorum)作为研究材料,利用EPR和原位红外探讨了短时高温对荒漠苔藓 叶片和原丝体水合组织膜结构的影响. 2实验部分 2.1仪器,试剂及材料 Bruker.EMX.8EPR(BrakerBioSpinCorp.,Germany),BIO-RADFT-185nIRMicroscope(内装液氮 冷却的窄带MCT检测器,美国VaranCorp.公司),真空干燥箱,真空抽滤机,培养箱(江南仪器厂). TEMPONE(4一氧-2,2,6,6-四甲基-吡啶),K3[Fe(CN)3],D2O(Sigma-aldrichCorp.,USA). 供试材料为刺叶墙藓(desertorum),经上海师范大学曹同教授鉴定,采集自新疆古尔班通古特沙 漠相邻土壤结皮. 2006-05—30收稿~20o6?11-13接受 本文系国家自然科学基金资助项目(No E—mail:xusj@.ca 第3期许书军等:顺磁共振和傅里叶变换红外光谱法研究高温对荒漠苔藓质膜结构影响351 2.2实验方法 2.2.1不同组织获得及生物热胁迫野外采集刺叶墙藓雌配子体经过48h直接水合后,按照Stark 叶龄划分标准,将刺叶墙藓叶片分为幼叶(1年生),绿叶(4年生),黄绿叶(6年生),黄叶(10年生). 叶片用Knop固体培养基(1.0g/LCa(NO3)2?4H2O,0.25g/LKH2PO4,0.12g/LKC1,0.25g/L MgSO?7H2O以及微量FeC1?6H2O)室内培养.培养条件设置为:湿度90%,光照时间为14h/d,昼 夜温度为20~C/10~C,光照强度为85～120PPFD.不同叶龄水合组织45~C水浴加热1h后备用. 2.2.2自旋标记EPR测定分别配置100mL的1mmolTEMPONE,120mmolK3[Fe(CN)6]溶液,保 存于0～4~C冰箱.材料浸入TEMPONE溶液,轻微摇动后静置20min,然后加入K.[Fe(CN)]溶液,静 置10min,抽滤至表面无水后载人2mm