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中国HIV-I暴露未感染者
CCR2-64I、
SDFl-3’A和CCR5A32的基因变异研究
王树祥尚红
(中国医科大学附属第一医院艾滋病研究室,沈阳110001)
(Explosedseronegative
79例中国HIV-I感染者(HIVseropositive,SP)的抗凝全血标本,用全自动核酸提取仪提
因突变率分别为31.58%衣I
和20.13%。两组CCR2-641突变率有显著性差异,PO.05;两组SDFl—3’A基因突变率无
突变,SP组有l例CCR5△32杂合突变。结论CCR2—64I基因突变或同时具有CCR2—64I和
染者的保护因素。
【关键词】人类免疫缺陷病毒l型(HIV—1):暴露未感者(explosedseronegative
individuals,ESN);辅助受体
国外报道有少数人长期暴露于HIV—l,如与HIV—l感染者无保护的性行为,与HIV一1感
染者共用注射器静脉吸毒,却未被感染,称之为暴露未感者(exposedseronegative
之有效结合,当趋化因子受体或某些趋化因子基因发生变异时,对HIV—l易感性/AIDS疾病
进程可能有不同程度的影响。研究发现有些ESN的趋化因子受体基因发生了突变,导致趋化
因子受体表达缺陷[2],进而阻止了HIV-1感染,研究者认为这类基因突变与个体对HIV—l
的易感性有关[3],多项研究也支持这一结论。国内研究发现亦有ESN,阻止其感染的原因
[基金项目]国家自然科学基金资助项目,教育部博士点专项20040159005
.128.
是什么?中国汉族人遗传背景不同于欧美白种人,研究明确此原因对防治眦v-1流行非常有
1材料和方法
1.1研究对象:选择辽宁省和吉林省19例女性ESN,其配偶为HIV-1感染者或AIDS病人,
与其配偶均有1年以上(20次以上)的无保护阴道性行为,经中国医科大学附属第一医院
性者分别来自辽宁省和吉林省,均经中国医科大学附属第一医院艾滋病确认实验室Western
blot实验确认为HIV-1感染。所有病例均为汉族。
PURE
LC全自动核酸提取仪提
1.2基因组DNA的提取:取抗凝外周静脉血200ul,用MAGNA
取基因组DNA,总核酸溶于100ul双蒸水中。操作严格按仪器说明书进行。
1.3CCR5△32基因的PCR分析:用PE-9600PCR仪进行目的基因片段扩增。正向引物序列:
5’ACCAGATCTCAA从AG从GGTcT 37;
PCR反应条件;94℃变性5min:94℃30s,55。C30s,72℃30s,35个循环;72C延伸7min。
PCR产物2ul直接进行2%琼脂糖凝胶电泳观察结果。
1.4 3’,
94。C
反向引物序列:5’TGCACATTGCATTCCcA从GACCC37;PCR反应条件:940变性5mim
30s,55C30
电泳;其余PCR产物进行RFLP分析,条件:用BseGI限制性内切酶于55C酶切2h,酶切
后取酶切产物2ul进行2%琼脂糖凝胶电泳观察结果。
1.5 7一CAGTC从CCTGGGCA从GCC一3’,
SDFl-3’A基因的PCR/RFLP分析:正向引物序列:5
94
。C30S,55。C30
h,酶
胶电泳;其余PCR产物进行RFLP分析,条件:用MspI限制性内切酶于37C酶切2
切后取酶切产物2ul进行
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