aiiA基因原核表达载体的构建与表达.pdfVIP

第42卷第10期 西北农林科技大学学报(自然科学版) V01．42No．10 ofNorthwestAF Oct．2014 2014年10月 Journal University(Nat．Sci．Ed．) 网络出版时间：2014—09一i018：19 DOI：10．13207／j．cnki．jnwafu．2014．10．055 aiiA基因原核表达载体的构建与表达 欧阳乐军，梁卓玲，黄真池，沙月娥，曾富华 (湛江师范学院生命科学与技术学院，广东湛江524048) [摘要]【目的】构建aiiA基因的原核表达载体，并进行诱导表达，检测aiiA蛋白的抗病性，为进一步通过转 基因技术培育转aliA基因植株奠定基础。【方法】从pMD”19一T 达条件优化结果表明，在25℃下用0．2mmol／LIPTG诱导9h，aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结 果表明，其能够降解细菌的AHLs信号分子，猝灭细菌的群体感应，明显减弱病菌的致病力。转aiiA基因尾巨桉抗 性检测结果表明，转基因植株抗性明显增强，表现为发病时间延迟，病情指数降低，评价为中等抗病水平。【结论】成 功构建了aiiA基因原核表达载体，其诱导表达产物能猝灭细菌的群体感应，明显减弱病菌的致病力。 [关键词]群体感应；aliA基因；N一酰基高丝氨酸内酯；N一酰基高丝氨酸内酯酶 [中图分类号]Q782 [文献标志码]A [文章编号] Constructionand of vectorforaiiA expressionprokaryotic gene Fu—hua OUYANGun，LIANG Zhen—chi，SHAYue—e，ZENG Le-j Zuo—ling，HUANG 524048，China) Scienceand NormalUniversity，Zhanjiang，Guangdong (Life TechnologySchool，Zhanjiang of vectorforalia therecombi— Abstract：[Objective]Constructionexpressionprokaryotic gene，then nant wasinducedto diseaseresistanceidentification．Thisworklaidthefoundationsforfu- plasmid express researchonaiiA the clonedthe ture study transgenic geneby planttransgenictechnology．[Method]The from 19一TVector+aiiAPCR．insertedinto andconstructed aiiA prokaryotic gene pMDTM by pGEX一4T一1