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产辅酶Q10大肠杆菌工程菌的构建.pdf

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产辅酶Q10大肠杆菌工程菌的构建.pdf

1000-565X(2012)05-0090-06 产辅酶Q10大肠杆菌工程菌的构建李家洲1谢明权李安兴2 罗晓春1 1.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006；．2.中山大学水生经济动物研究所，广东广州510275 摘要：克隆放射型根瘤茵ddsA基因，用于构建red重组的打靶片段，通过同源重组替换大肠杆菌基因组上的ispB基因，使合成辅酶Q8的大肠杆菌具备合成辅酶Q10的能力.通过强化辅酶Q合成过程中的ddsfA、ubiA、ispA、idi等关键酶基因，可使大肠杆菌辅酶Q10的合成能力提高126.9％.综合分析表明，ddsA与ubiA为辅酶Q10合成的关键基因，ispA与idi 为辅酶Q10合成的次关键基因. 辅酶Q；大肠杆菌；ddsA基因；工程菌；同源重组 Q789；Q569 10.3969/j. issn. 1000-565X. 2012.05. 016 2011-10-09 *基金项目：广东省自然科学基金资助项目(7004113)；广东省工业攻关项目(2011B010500018) 作者简介：李家洲(1976-)，男，博士生，副教授，主要从事微生物分子生物学和微生物工程研究.E-mail: 2003102021@ gditc. edu.cn +通讯作者：罗晓春(1977-)，男，副教授，主要从事分子生物学研究.E-mail：xcluo@ scut. edu. cn wJ~Ju s,30 A-T 、11泳道】为进一j ：寸羟基j ：物为法鲁隹稿篷蘸 @@[ 1 ] Ernster L,Dallner G. Biochemical, physiological and medi cal aspects of ubiquinone function [ J ]. Biochimica et Biophysica Acta, 1995,1271 ( 1 ) : 195-204. @@[2] Consuelo Gormez-Diaz, Juan Carlos Rodriguez-Aguilera, Maria P Barroso,et al. Antioxidant ascorbate is stabilized by NADH-cocnzyme Q10 ruductase in the plasma mem brane [ J ]. Journal of Bioenergetics and Biomembranes, 1997,29(3 ) :251-257. @@[3] David Petillo,Herbert O Hultin. Ubiquinone-10 as an an tioxidant [ J ]. Journal of Food Biochimistry, 2008, 32 (2) :173-181. @@[ 4] Laura Papucci, Nicola Schiavone,Ewa Witort,et al. Coen zyme Q10 prevents apoptosis by inhibiting mitochondrial depolarization independently of its free radical scavenging property [ J ]. The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278 ( 30 ) :28220-28228. @@[5 ] Kwon O, Kotsakis A, Meganathan R. Ubiquinone (coen zyme Q) biosynthesis in Eshcherichia coli:identification of the ubiF gene [J]. FEMS Microbiology Letters,2000,186 (2) :