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基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因重组腺病毒载体的构建 周毅1,2屠冠军1 1.中国医科大学附属第一医院骨科，沈阳1100012.沈阳医学院沈洲医院骨科，沈阳110002 目的 为探讨基因治疗逆转或延缓椎间盘退变的可行性，构建及制备人基质金属蛋白酶组织抑制剂1 (tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1) cDNA重组腺病毒载体。方法 以含TIMP1 cDNA序列的质粒为模板，通过PCR方法扩增TIMP1 cDNA片段，将TIMP1 cDNA全长定向克隆到Ad5MaxTM腺病毒系统的穿梭质粒pDC316上，构建pDC316- TIMP1穿梭质粒；使 用Ad5MaxTM腺病毒包装系统，脂质体介导的穿梭质粒及骨架质粒pBHGlox-E1，3Cre共转染HEK293细胞，同源重组构建含 TIMP1 cDNA的重组腺病毒Ad5- TIMP1，通过PCR方法鉴定重组腺病毒Ad5- TIM P1的正确性。通过阴离子柱层析方法纯化重 组腺病毒Ad5-TIMP1并测定重组腺病毒感染滴度。结果 经PCR及酶切方法证实pDC316-TIMP1穿梭质粒中存在630 bp大 小左右的插入片段，与目的基因TIMP1的cDNA大小一致；经PCR鉴定证实TIMP1 cDNA重组腺病毒载体Ad5- TIMP1构建成 功，病毒感染性滴度为1×1010 IU/mL。结论 成功构建TIMP1 cDNA重组腺病毒载体，为应用基因治疗方法逆转或延缓椎间盘 退变的研究奠定实验基础。 基质金属蛋白酶组织抑制剂1；腺病毒载体；基因转染；椎间盘 R605 A 0258-4646(2012)09-0805-05 Construction of Recombinant Adenovirus Vector Carrying the Human Tissue Inhibitor of Metalloproteinase 1 cDNA ZHOU Yi TU Guan-jun 国家自然科学基金资助项目(;辽宁省教育厅 高等学校科研项目计划(L2010710) 周毅（1974 -），男，副主任医师，硕士. 2011-12-26 曼75 cm2培养瓶中 继续培养，每天期 待细胞出现大部爿 ~PI fragment( 3 900 bp [] 3 pDC316-TI Fig.3 Agarose g 8.9 研究采用AdM 染HEK293细 、D士『L+曲占^七日d sessed by the bispectral index, related to postoperative cognitive dys function and recovery[ J ]. Anesth Analg, 2006,103 (3) : 633-640. @@[ 5] Rasmussen LS, Johnson T, Kuipers HM, et al. Does anaesthesia cause postoperative cognitive dysfunction? A randomised study of regional versus general anaesthesia in 438 elderly pati