FQ-PCR与ELISA法检测婴幼儿巨细胞病毒感染的比较研究.docVIP

精品论文 参考文献 FQ-PCR与ELISA法检测婴幼儿巨细胞病毒感染的比较研究 邓国伟 　　湖南省益阳市资阳区妇幼保健院 413001 　　【摘 要】目的：探讨FQ-PCR与ELISA法检测诊断婴幼儿巨细胞病毒感染的临床价值。方法：选取我院2012年12月-2014年12月间135例临床疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿为研究对象，采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测患儿的血清HCMV-IgM抗体，同时采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测患儿尿液HCMV-DNA水平。结果：ELISA法检测血清HCMV-IgM的阳性率为16.30%，FQ-PCR法检测尿HCMV-DNA的阳性率为36.30%，FQ-PCR法检测阳性率明显高于ELISA法，两组数据比较有统计学差异（Plt;0.01）；二者检测HCMV感染的一致率为78.52%。结论：相比于ELISA法检测，FQ-PCR法监测尿HCMV-DNA，检出率和敏感性更高，简单易行，在HCMV的早期诊断和疗效判断中有重要意义，有临床推广价值。 　　【关键词】巨细胞病毒；婴幼儿；聚合酶链反应；酶联免疫吸附试验 　　人巨细胞病毒（HCMV）是一种线状双链DNA病毒，是我国婴幼儿常见的感染病之一，其病变能累及多个系统器官，且无特异性临床表现，只在尿中排毒[1]。因此，对婴幼儿巨细胞病毒感染做出早期诊断具有极其重要的意义。本文采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与酶联免疫吸附试验（ELISA）两种检测方法对135例疑似婴幼儿巨细胞病毒感染患儿进行实验室检查，并对检测结果进行了对比分析，现将结果汇报如下。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　本研究病例选自2012年12月-2014年12月来我院就诊的确诊或疑似HCMV感染患儿，共135例，收集入选患儿的尿液和血清标本，其中男71例，女64例，年龄2个月-5岁，平均（2.8plusmn;0.7）岁。依据《巨细胞病毒感染诊断方案》[2]，CMV-IgM阳性表示为活动性或原发CMV感染，尿液PCR-CMV-DNA阳性则可诊断为CMV感染并有产毒性。 　　1.2 方法 　　1.2.1采集标本：采集所有入选患儿静脉血2ml，进行血清分离，并放置在-20℃冰箱保存，尽量一周内进行HCMV-IgM检测；留取所有患儿3ml新鲜晨尿，置于无菌干燥管中，1d内进行HCMV-DNA检测。 　　1.2.2 实验室检测（1）尿HCMV-DNA检测。使用FQ-PCR法检测，仪器采用Light Cycler荧光定量PCR仪，CMV-DNA检测采用广州中山达安基因公司提供的试剂盒，检测范围为103～107copi-es/ml。严格按照试剂盒说明书进行提取尿液HCMV-DNA操作。进行实时荧光定量PCR的扩增，操作条件为93℃，2分钟预变性；93℃，45s，55℃，60s，计10个循环；93℃，30s，55℃45s，计30个循环；最终在55摄氏度45s处进行单点荧光检测。 反应体系是50mu;l，选用FAM通道进行HCMV-DNA定量检测，依据质控标准，结果＞1times;103copies/ml判定为阳性[3]。（2）HCMV-IgM检测。采用ELISA法检测，采用上海贝尔公司提供的试剂盒，按照试剂说明书操作并判断结果。 　　1.3 数据处理方法 本研究数据采用SPSS17.0处理分析，计数资料间比较采用X?检验，以ɑ=0.05为检验水准。 　　2 结果。 　　ELISA法检测血清HCMV-IgM阳性率与FQ-PCR法检测尿HCMV-DNA阳性率比较有统计学差异（X?=13.93，Plt;0.01），二者检测HCMV感染的一致率为78.52%（106/135）。详见表1： 　　表1 血清HCMV-IgM与尿HCMV-DNA检测结果（n） 　　HCMV-IgM检测结果 尿HCMV-DNA检测 合计 　　 HCMV-DNA阳性 HCMV-DNA阴性 　　HCMV-IgM 21 1 22 　　HCMV-IgM 28 85 113 　　合计 49 86 135 　　3讨论 　　HCMV属于疱疹病毒科beta;亚科，其直径为180-250nm，HCMV感染在我国流行广泛，尤其是免疫力低下的小儿及胎儿容易受害，是引发小儿智力低下、发育迟缓、先天畸形的重要病原体。目前临床上治疗HCMV感染主要采用更昔洛韦，其抗 HCMV特异性较强，疗效较好，对小儿HCMV感染进行早期、准确、快速的诊断，对患儿合理、及时治疗及其预后有积极的意义。 　　临床上检测HCMV的经典方法是病毒分离，不过HCMV病毒分离培养比较困难，且受多种影响因素干扰，分离敏感性较差，临床实验室不宜开展应用。临床上应用较多的检测技术则是ELISA检测法，该检测方法是活动性HCMV感染的重要评估指标，它通常在机